[发明专利]一种多囊肾疾病致病基因扩增引物组及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种多囊肾疾病致病基因扩增引物组，所述引物组能够扩增多囊肾疾病致病基因PKD1和PKD2的全部外显子区及外显子与内含子连接处侧翼序列至少50bp，同时，本发明还提供了一种多囊肾疾病致病基因检测试剂盒，所述检测试剂盒包括所述引物组。本发明通过设计长片段扩增子引物，避开假基因及高GC区域，设计的引物能够将PKD1和PKD2的全部外显子进行扩增，并且扩增的准确性和成功率得到提高，通过将PKD1和PKD2扩增引物组应用于检测试剂盒，提高试剂盒检测的准确性，简化试剂盒的操作步骤，节省操作时间和成本，不易出错。

技术领域

本发明属于检验技术领域，具体涉及一种多囊肾疾病致病基因扩增引物及其检测试剂盒。

背景技术

多囊肾疾病(Polycystic Kidney Disease,PKD),根据遗传方式不同，分为常染色体显性和隐性遗传肾病，PKD患者肾脏囊肿往往表现出持续性的不断形成和增大，约50％的常染色体显性遗传多囊肾病(Autosomal Dominant Polycystic Kidney Disease,ADPKD)最终发展为终末期肾病，严重威胁病人生活质量和生命健康。ADPKD发病率高，约1/400-1/1000，全球大约有0.12亿病人。因此，加强对PKD病人的早期诊断，明确致病变异位点，有效干预和治疗对PKD疾病有着重要意义。

研究表明，ADPKD主要有PKD1和PKD2两个基因突变致病，其中PKD1突变占病因约85％，PKD2基因变异约占全部病因15％。变异具有高度异质性，未有热点突变，点突变约占97％，剩余大片段插入缺失、重排等占到约3％。PKD1有46个外显子，编码区约14.6kb，其1-33号外现在有6个高度同源的假基因，基因空间复杂，相似性高达98％，部分区域GC含量高达80％，基因空间复杂，以上因素导致 PKD1基因检测难度增加。

现有技术中常用的DNA高效液相层析(DHPLC)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、单链构象多态性分析(SSCP)等方法，只能检测是否有变异，不能直接针对核酸序列测序得到明确变异。并且长片段PCR后sanger测序，需要对几十kb的长片段进行测序，工作量大，PCR 体系复杂，针对不同长片段需要用到不同添加剂组成的体系、PCR程序，且sanger测序受复杂基因结构及高GC等特殊序列干扰测序难度大、通量低、成本高。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种多囊肾疾病致病基因扩增引物组及其检测试剂盒，使用该引物组扩增能够覆盖多囊肾疾病致病基因PKD1和PKD2的全部外显子，并优化了PCR体系和程序，采用高通量测序方法代替sanger测序，降低测序难度、测序通量高、成本低。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种多囊肾疾病致病基因扩增引物组，所述引物组能够扩增多囊肾疾病致病基因PKD1和PKD2的全部外显子区及外显子与内含子连接处侧翼序列至少50bp。

优选地，所述引物组包含18对引物，引物设计时避开致病基因中的假基因和高GC区域，引物扩增片段长度为1206-5356bp。

优选地，所述引物组包含下所述的引物：

另一方面，本发明提供一种多囊肾病致病基因检测试剂盒，所述试剂盒包括上述的引物组。

优选地，所述检测试剂盒还包括DNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、纯化试剂盒、建库试剂盒、测序试剂盒。