[发明专利]一种基因编辑单细胞的快速筛选方法

权利要求书

1.一种基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)将单一细胞于96孔细胞培养板中进行培养，然后，去除培养基并进行消化、孵育；

(b)再向孵育后的96孔细胞培养板中加入含10％FBS的DMEM培养基并进行吹打，再继续培养；

(c)培养结束后去除培养基并进行消化、孵育，孵育结束后，再添加含10％FBS的DMEM培养基并进行吹打，取出部分吹打后的细胞悬液置于96孔PCR板中，再向96孔细胞培养板中加入含10％FBS的DMEM培养基进行培养；

(d)将96孔PCR板进行密封、离心、静置、再离心，然后，采用96孔吸液板吸去上清液；

(e)在去除上清液的96孔PCR板中加入PH为8.0的1xTE buffer缓冲液，密封96孔PCR板后，于95℃下处理8～12min，再进行离心处理，收集上清，即得细胞基因组DNA；

(f)以细胞基因组DNA为模板扩增包含基因编辑位点的基因片段，再进行测序，根据测序结果确认基因编辑的单细胞。

2.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(a)中，培养时间为7～10天；消化采用的消化液为0.25％Trypsin；孵育时间为2～4min。

3.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(b)中，继续培养的时间为2～3天。

4.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(c)中，消化采用的消化液为0.25％Trypsin；孵育时间为2～4min。

5.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(d)中，静置时间为35～45min，温度为室温；再离心的转速为2200～2800g，时间为10～15min。

6.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述步骤(e)中，离心转速为2000～2500g，时间为8～12min。

7.根据权利要求1所述的基因编辑单细胞的快速筛选方法，其特征在于，所述1xTEbuffer缓冲液为Tris/EDTA缓冲液。