[发明专利]一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器

说明书

本发明属于传感器技术领域，涉及一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器，具体涉及目标介导DNAzyme催化裂解、链置换(SDA)触发电极表面DNA四面体封闭链释放、电极上的滚环扩增反应(RCA)以AgNC催化过氧化氢反应用于检测赭曲霉毒素A(OTA)的电化学生物传感器。基于OTA及其适配体的特异性识别、DNAzyme的催化裂解反应、SDA反应、RCA反应，以及DNA四面体的特殊性质构建了电化学生物传感器。该传感器具有检测速度快，检测限低，特异性高等优点，可以弥补OTA现有检测方法的缺陷与不足，实现对其快速、准确的定量检测。

技术领域

本发明属于传感器技术领域，涉及一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器，具体涉及目标介导DNAzyme催化裂解、链置换(SDA)触发电极表面DNA四面体封闭链释放、电极上的滚环扩增反应(RCA)以AgNC催化过氧化氢反应用于检测赭曲霉毒素A(OTA)的电化学生物传感器。

背景技术

赭曲霉毒素是一类真菌次生代谢物，是一种典型的生物毒素，其中赭曲霉毒素A（OTA）毒性强、污染广、难降解去除，能侵害人体肝肾，并引发大多数哺乳动物产生癌症、肝肾中毒。OTA广泛产生于食品、饲料加工和储存运输过程，在水体中也会有少量存在。国际癌症研究机构将赭曲霉毒素A列为一种潜在的人类致癌物。我国豆类、谷类食品及其制品中OTA的标准限量为5 μg/kg ，酒类（葡萄酒）中OTA的标准限量为2 μg/kg 。

目前检测OTA的方法有很多，如光学分析法、电泳法、色谱法等。但这些分析方法存在程序繁琐、仪器昂贵、设备复杂等缺点，不适合现场检测。因此，开发快速、痕量、高灵敏度和选择性的检测 OTA的分析方法是十分必要的。

发明内容

为了实现更加灵敏、特异性的检测赭曲霉毒素A OTA，本申请提出了一种目标介导DNAzyme催化裂解，经链置换触发电极表面DNA四面体封闭链释放，进而引发电极上的滚环扩增反应，最终通过AgNC催化过氧化氢反应构建检测OTA的电化学生物传感器。

本发明的技术方案如下：

一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器，包括赭曲霉毒素A的适配体Apt、DNAzyme发夹H、触发链T、连接探针LP、挂锁探针PP、PBS缓冲液、DNA聚合酶、Mg²⁺，银簇链AgNC以及形成四面体的DNA链S1、S2、S3、S4和封闭链B；

所述赭曲霉毒素A的适配体Apt的序列为SEQ ID No:1；

所述DNAzyme发夹H的序列为SEQ ID No:2；

所述触发链T的序列为SEQ ID No:3；

所述连接探针LP的序列为SEQ ID No:4；

所述挂锁探针PP的序列为SEQ ID No:5；

所述银簇链AgNC的序列为SEQ ID No:6；

所述S1的序列为SEQ ID No:7；

所述S2的序列为SEQ ID No:8；

所述S3的序列为SEQ ID No:9；

所述S4的序列为SEQ ID No:10；

所述封闭链B的序列为SEQ ID No:11；

所述赭曲霉毒素A的适配体Apt的序列为：5’-GATC GGGTGTGGGTGGCGTAAAGGGAGCATCGGACA-3’；

所述DNAzyme发夹H的序列为：5’- GCCGT TGTCCGATGC GTGGGT rA GTAGTTCAGGTTTTTTTTTT CCTGAACTAT CCGAGCCGGTCGAAA ACCCACACCC -3’；