[发明专利]一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器

权利要求书

1.一种基于DNA四面体的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器，其特征在于，包括赭曲霉毒素A的适配体Apt、DNAzyme发夹H、触发链T、连接探针LP、挂锁探针PP、PBS缓冲液、DNA聚合酶、Mg²⁺，银簇链AgNC以及形成四面体的DNA链S1、S2、S3、S4和封闭链B；

所述赭曲霉毒素A的适配体Apt的序列为SEQ ID No:1；

所述DNAzyme发夹H的序列为SEQ ID No:2；

所述触发链T的序列为SEQ ID No:3；

所述连接探针LP的序列为SEQ ID No:4；

所述挂锁探针PP的序列为SEQ ID No:5；

所述银簇链AgNC的序列为SEQ ID No:6；

所述S1的序列为SEQ ID No:7；

所述S2的序列为SEQ ID No:8；

所述S3的序列为SEQ ID No:9；

所述S4的序列为SEQ ID No:10；

所述封闭链B的序列为SEQ ID No:11；

所述挂锁探针PP的5’端磷酸化处理；所述的S2、S3、S4链的3’端修饰有巯基-SH，目标物为赭曲霉毒素A。

2.根据权利要求1所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器，其特征在于，DNAzyme发夹H经过催化裂解释放触发链T，在电极上依次进行链置换暴露DNA四面体封闭链B、滚环扩增反应产生大量银簇链AgNC结合区域和银簇催化过氧化氢反应产生电化学信号。

3.权利要求1或2所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）环状模板CT的构建与银簇链AgNC的制备；所述环状模板CT通过挂锁式探针PP和连接探针LP在T4 DNA连接酶的辅助下杂交而成；所述银簇链AgNC通过AgNC核酸序列、AgNO3溶液通过NaBH₄还原得到；

（2）对电极进行预处理；

（3）DNA四面体制备及其修饰到电极表面；

（4）均相反应产生电极反应的触发链T；

（5）电极上的链置换、环状模板CT的捕获及滚环扩增反应及其产物对银簇链的捕获。

4.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）的过程为：电极在氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS和二次水反复冲洗；所述步骤（2）的电极为金电极。

5.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）的DNA四面体的制备过程为：将等摩尔量的DNA四面体五条链混合在TM缓冲液中，反应，备用。

6.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）的修饰到电极表面的过程为：将制备好的DNA四面体与三(2-羧乙基)膦TCEP注入电极，在室温下反应过夜。

7.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）均相反应的过程为：

a.将赭曲霉毒素A的适配体和DNAzyme发夹H，灭菌，振荡，水浴锅中保持，形成H-Apt探针后冷却至室温；

b.取灭菌水，5×PBS缓冲液，步骤a的H-Apt探针，Mg²⁺，5 µL赭曲霉毒素A于灭菌的离心管中，振荡，孵育。

8.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（5）的过程为：取触发链T、DNA聚合酶反应缓冲液、10×RCA buffer、环状模板CT、dNTP以及银簇链AgNC，滴加到步骤（3）的电极上，然后将电极继续放在37℃的恒温箱中4h，清洗。

9.权利要求3所述的制备方法制备的检测赭曲霉毒素A的电化学生物传感器在检测食品、环境中赭曲霉毒素A上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，电位设置为0到-0.7 V，脉冲宽度0.05 V，扫描速率为0.05 s，采用差分脉冲伏安法读取电信号的变化，检测待测目标物。