[发明专利]表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗、制备方法及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗、制备方法及应用。本发明采用反向遗传操作技术将编码IBV S蛋白基因以不同形式插入热稳定新城疫疫苗毒株(rTS09‑C)基因组，构建筛选获得表达IBV三种形式S蛋白的重组热稳定新城疫载体疫苗毒株，及表达一种优化形式S蛋白与N蛋白T细胞表位保守肽段的重组新城疫载体疫苗毒株。所构建的四株表达IBV抗原蛋白重组热稳定新城疫载体疫苗毒株均具有耐热、低毒和遗传特性稳定特征；重组新城疫载体疫苗免疫接种能诱导鸡体产生特异性免疫应答和抗NDV和IBV强毒株致死攻毒感染的免疫保护。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗、制备方法及应用。

背景技术

目前，对禽类养殖业危害最为严重的两类疫病是新城疫(Newcastle disease,ND)与高致病性禽流感(high pathogenic avian influenza,HPAI)。此外，由于鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)的影响范围也逐渐扩大，近年来引起人们对该禽类病毒的高度关注。新城疫、高致病性禽流感和鸡传染性支气管炎分别是由新城疫病毒(Newcatledisease virus,NDV)、高致病性禽流感病毒(high pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)感染禽类引起的烈性传染性疫病。

新城疫(ND)是一种多禽类发生的、急性的、高接触性且高死亡率的疫病。ND的爆发往往对家禽养殖业造成巨大的经济损失。目前，ND的防控主要为免疫预防。新城疫病毒(NDV)属于副黏病毒科(Paramyxoviridae)、副黏病毒亚科(Paramyxovirinae)、禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)。该病毒具有囊膜结构，且囊膜表面有纤突；NDV的基因组为单股负链RNA，长约为15kb。由于NDV能够有效地诱导机体产生强烈的免疫应答，可通过反向遗传学的方法对其改造，并将其设计构建为疫苗载体。作为一种新型疫苗，新城疫病毒载体疫苗与传统疫苗相比，具有诸多优势及良好的应用前景，是当今和未来疫苗研究开发的重要研究方案之一。

传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)感染导致禽类的急性高度接触传染性疾病，通常会引起家禽的肾脏及呼吸道损伤，给家禽养殖业造成巨大损失。纤突蛋白(Spike protein,S)是传染性支气管炎病毒的最重要的结构蛋白，构成病毒纤突。S蛋白包含S1和S2两个亚基，均属于糖蛋白，其中，S1蛋白对病毒毒力、组织嗜性和血清型起到决定性作用，并能够诱导宿主产生体液及细胞免疫应答，在载体疫苗和亚单位疫苗的研究中具有重要意义。

传染性支气管炎病毒包含多种血清型，不同血清型间不具有交叉保护效果，因此，设计一种能够诱导对多种血清型IBV毒株产生保护作用的疫苗在IBV疫苗研发中具有重要意义。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗、制备方法及应用，目的在于解决现有技术中的问题或至少解决现有技术中的一部分问题。

本申请采用反向遗传操作技术策略将传染性支气管炎病毒S蛋白以不同形式插入热稳定新城疫疫苗株基因组，构建筛选获得四株重组新城疫载体疫苗毒株。重组载体疫苗病毒特性研究证实，所构建的四株均具有耐热、低毒、遗传稳定和高效表达外源抗原蛋白；SPF鸡免疫与感染实验证实，四株重组新城疫载体疫苗免疫均能诱导产生特异性免疫应答和抗NDV和IBV强毒株感染的免疫保护。重要的是，将IBV的tS1与N蛋白包含T细胞表位的肽段融合表达能显著增强rTS-tS1/Nd毒株诱导的IBV特异性细胞免疫应答水平和提供免疫鸡针对IBV强毒株攻毒感染的免疫保护。本申请的研究技术为发展基于热稳定新城疫疫苗株为载体的重组新城疫载体双价或多价疫苗提供了新思路和有益借鉴。