[发明专利]表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗、制备方法及应用有效
| 申请号： | 202110832593.8 | 申请日： | 2021-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN113462660B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 潘兹书;许路来;温国元 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/50;A61K39/295;A61K39/17;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 张晓博 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 传染性 支气管炎 病毒 蛋白 重组 新城 载体 疫苗 制备 方法 应用 | ||
1.表达禽传染性支气管炎病毒S蛋白重组新城疫载体疫苗在制备诱导机体产生针对新城疫病毒和/或传染性支气管炎病毒的特异性免疫应答功能的试剂中的应用，其特征在于：以新城疫热稳定疫苗rTS09-C株为材料，通过反向遗传操作将传染性支气管炎病毒S蛋白插入rTS09-C基因组的P和M基因之间，拯救获得重组新城疫载体疫苗；
所述传染性支气管炎病毒S蛋白为SEQ ID NO.4所示的tS1/Nd蛋白；
利用引物对载体质粒pTS09-C进行扩增，得到线性化后的目的载体片段；
利用引物序列分别扩增SEQ ID NO.1-3和SEQ ID NO.5所示的序列得到tS1和Nd片段；将tS1片段和Nd片段通过重叠延伸的方式连接，组成tS1/Nd片段；
分别连接目的片段和载体，得到质粒pTS-tS1/Nd；
经过病毒拯救，分别得到重组新城疫载体疫苗rTS-tS1/Nd；
利用如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示的引物序列对载体质粒pTS09-C进行扩增；
利用如SEQ ID NO.12-SEQ ID NO.13所示的引物序列分别扩增得到tS1和Nd片段；
使用同源重组酶In-fusion酶连接目的片段和载体。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述特异性免疫应答包括诱导机体产生相应抗体。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述特异性免疫应答包括调控机体IFN-γ的含量。
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