[发明专利]寡糖标志物及其在燕窝鉴定中的应用

说明书

本发明涉及质控标志物，以及应用这类标志物鉴定燕窝的方法。具体而言，本发明涉及寡糖标志物，以及其在快速、专属、高效、低成本鉴定燕窝原材料及其相关产品中的应用和鉴定方法。

技术领域

本发明涉及质控标志物，以及应用这类标志物鉴定燕窝的方法。具体而言，本发明涉及寡糖标志物，以及其在快速、专属、高效、低成本鉴定燕窝原材料及其相关产品中的应用和鉴定方法。

背景技术

燕窝(edible bird’s nest，EBN)是雨燕科金丝燕属(Aerodramus或 Collocalia)的多种鸟类分泌的唾液与其羽绒混合凝结而筑成的巢。其中主要成分为糖蛋白，包含62-63％的蛋白质，25-27％的碳水化合物。现代研究表明，其具有免疫促进作用、抗病毒、促有丝分裂、强心等广泛药理学作用。因此，燕窝，作为一种在亚洲享有盛誉的功能性食品，深受消费者喜爱，具有较高的市场价值。但是，随着需求市场的增长，频频出现燕窝伪劣产品，常常以猪皮、银耳、琼脂等外观及口感类似的物质作为替代品，损害消费者权益，对燕窝市场及相关的质量监管带来巨大冲击。

目前关于燕窝的鉴定，开发了一系列方法，但所涉及方法均存在特异性差、耗时长、操作繁琐等缺点。例如，通过测定燕窝中的唾液酸含量进行鉴定，也有文献报道通过测定单糖进行鉴定。然而，唾液酸、甘露糖、N-乙酰基-半乳糖胺等单糖特异性均低，在鸡蛋，牛奶等动物制品中广泛存在，其鉴定结果的准确性偏低。再如，通过采用实时荧光PCR(血纤蛋白原和NADH 脱氢酶的靶向基因)和SDS-PAGE二维凝胶电泳等测定氨基酸组成、多肽谱进行鉴定。然而，这些方法灵敏度较低，不适用于蛋白含量较低的燕窝样品。同时，这些方法涉及提取、表征、酶解等多个步骤，操作繁琐耗时，在大批量样品的检测中，产生较高成本。在红外光谱、LC-MS结合统计学等其他手段中均存在类似的局限性。

因此，迫切需要发展对燕窝中独有的标志性成分的筛选和鉴定，建立具有简单快速、准确、低成本、高灵敏度、高特异性、高重复性，并且适用于大批量样本的商业应用的鉴定方法。

发明内容

本发明涉及用于燕窝鉴别的寡糖标志物、寡糖标志物的制备方法、通过寡糖标志物鉴定燕窝的方法，以及寡糖标志物在快速、专属、高效、低成本鉴定燕窝原材料及其相关产品中的应用。

本发明所述的寡糖标志物及其在燕窝快速鉴定中的应用具有如下特点：特异性强、灵敏度高、操作简单、30min内可完成检测、实用性强，在燕窝原材料与相应产品均适用，具有广阔的市场前景和较大的经济和社会效益。

在本发明的一个方面，本发明涉及一种鉴别燕窝的方法，包括：

a.对燕窝样品中的碳水化合物进行检测；

b.鉴定燕窝样品中碳水化合物的一种或者多种寡糖标志物。

在本发明的一个方面，在上述鉴别燕窝的方法中，所述检测方法选自色谱分析法、光谱分析法、质谱分析法、色谱联用分析法、色谱-光谱联用分析法、色谱-质谱联用分析法、毛细管电泳分析法、免疫分析法、核酸适配子结合分析法及其组合；优选地，所述检测方法为液相色谱-质谱联用法，特别优选LC-DAD-Q-TOF-MS法和液相色谱-三重四极杆串联质谱(LC-QqQ- MS/MS)。

在本发明的一个方面，在上述鉴别燕窝的方法中，所述液相色谱的色谱条件为：所述液相色谱的色谱柱选自硅胶基质色谱柱、聚合物基质色谱柱、或者其他无机填料色谱柱，优选地，使用C18十八烷基键合硅胶液相色谱柱、 C8辛烷键合硅胶液相色谱柱、NH2氨基键合硅胶色谱柱、二醇基键合硅胶色谱柱、苯基键合硅胶色谱柱、离子交换色谱柱或者酰胺基键合硅胶色谱柱。