[发明专利]肝癌的检测和诊断的试剂及试剂盒

说明书

本申请提供一种肝癌检测和诊断的试剂及试剂盒，通过对TCF24基因CpG岛DNA甲基化水平的检测，实现肝癌诊断或辅助诊断，具有良好的灵敏度和特异性，该试剂在血液样本中仍具有优异检测效果，可应用于肝癌的无创检测以及早期筛查。

技术领域

本申请涉及生物医药技术领域，具体涉及一种肝癌的检测和诊断的试剂及试剂盒。

背景技术

原发性肝癌是我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因。原发性肝癌主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌和肝细胞癌-肝内胆管癌混合型3种不同病理学类型，其中肝细胞癌占85％～90％。由于肝细胞癌早期症状不明显，我国民众普遍缺乏疾病预防和体检意识，往往诊断时已经到达中晚期，失去手术机会。早筛早诊早治是降低肝细胞癌发病率与死亡率的有效方法，方便、安全、快捷、高通量的筛查方法尤为重要。

目前我国肝细胞癌诊疗指南推荐的方案是：高危人群，每隔6个月进行1 次肝脏超声检查和血清甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)检测，进行肝癌早期筛查。AFP是目前唯一可用的检测和监测肝癌的血液标志物，但AFP的灵敏度和特异性仅为58.2％和85.3％，难以满足肝细胞癌早筛早诊的临床需求。影像学检查对早期肝细胞癌的确诊仍然相当困难，在实际应用中易受病灶大小、机器灵敏度及操作者水平等因素的影响。为了提高我国肝细胞癌高风险人群的早诊比例，急需一种灵敏性和特异性高的检测方法来普及肝癌早筛并提高早期筛查的准确度。

现有技术表明血液中的循环肿瘤DNA(Ct DNA)与肿瘤组织中的DNA 有很强的一致性，然而目前已报道的肝细胞癌血液标记物很少，且灵敏性和准确性不高。

发明内容

本申请提供一种肝癌的检测试剂及试剂盒，可以用于肝癌诊断或辅助诊断，具有良好的灵敏度和特异性。

第一方面，本申请提供一种肝癌的检测和诊断的试剂，所述试剂包括：能够特异性检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂，所述靶核苷酸序列源自TCF24基因的CpG岛的全长或部分区域。

可选的，所述CpG岛的核苷酸序列为SEQ ID NO.48及SEQ ID NO.49所示核苷酸序列中的一种或两种。

可选的，所述部分区域的核苷酸序列包括SEQ ID NO.34至SEQ ID NO.44 所示核苷酸序列中的至少一种。

可选的，所述试剂包括：

(a)反应试剂，能差异修饰所述DNA样本中的甲基化位点和非甲基化位点；以及

(b)检测试剂，在用所述反应试剂处理DNA样本之后，所述检测试剂能通过甲基化检测方法确定所述靶核苷酸中的特定CpG二核苷酸位点中的胞嘧啶的甲基化水平。

可选的，所述反应试剂包括重亚硫酸盐或其衍生物；和/或，

所述甲基化检测方法包括：甲基化特异性PCR法、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率溶解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法及QuARTS(例如参见专利文献US8715937B2)法。

可选的，所述试剂包括：PCR试剂，所述PCR试剂包括能特异性检测所述靶核苷酸的甲基化特异性引物对和/或特异性探针。

可选的，所述引物对包括如下引物对中的任一组：

SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合；

SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合；

SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合；

SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合；