[发明专利]肝癌的检测和诊断的试剂及试剂盒

权利要求书

1.一种肝癌的检测和诊断的试剂，其特征在于，所述试剂包括：能够检测DNA样本中靶核苷酸序列中的至少一个CpG二核苷酸位点甲基化水平的试剂，所述靶核苷酸序列为TCF24基因CpG岛的部分区域，所述部分区域的核苷酸序列为SEQ ID NO.34-37以及SEQ IDNO.39-44所示核苷酸序列中的至少一种；

所述试剂包括PCR试剂，所述PCR试剂包括能特异性检测所述靶核苷酸的甲基化特异性引物对和特异性探针，其中，所述甲基化特异性引物对和所述特异性探针包括下述任意一组：

(1)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.3；

(2)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.6；

(3)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.9；

(4)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.10和SEQ ID NO.11的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.12；

(5)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.16和SEQ ID NO.17的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.18；

(6)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.21；

(7)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.22和SEQ ID NO.23的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.24；

(8)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.27；

(9)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.28和SEQ ID NO.29的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.30；和/或

(10)所述甲基化特异性引物对为SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32的组合，所述特异性探针选自SEQ ID NO.33。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括：

(a)反应试剂，能差异修饰所述DNA样本中的甲基化位点和非甲基化位点；以及

(b)检测试剂，在用所述反应试剂处理DNA样本之后，所述检测试剂能通过甲基化检测方法确定所述靶核苷酸中的特定CpG二核苷酸位点中的胞嘧啶的甲基化水平。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，所述反应试剂包括重亚硫酸盐或其衍生物。

4.根据权利要求2或3所述的试剂，其特征在于，所述甲基化检测方法包括：甲基化特异性PCR法、亚硫酸氢盐测序法、甲基化特异性微阵列法、全基因组甲基化测序法、焦磷酸测序法、甲基化特异性高效液相层析法、数字PCR法、甲基化特异性高分辨率熔解曲线法、甲基化敏感性限制性内切酶法及QuARTs法。

5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述DNA样本来自哺乳动物的离体生物学样本，所述哺乳动物的离体生物学样本来自血液、血浆、肝脏组织及肝来源的细胞样本中的至少一种。

6.一种用于肝癌的检测和诊断的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至5任一项所述的试剂。