[发明专利]一组猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗原多肽及其应用

说明书

一组猪繁殖与呼吸综合征病毒的抗原多肽及其应用，它涉及生物检测技术领域，本发明要解决在血清学上无法有效区分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程标记弱毒疫苗的问题，本发明的抗原肽是由序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2中的一种或者两种所示的多肽组成的组合物。它用于制备ELISA诊断试剂盒。本发明筛选可用于鉴别诊断的蛋白多肽，并建立相应的间接ELISA检测方法。为今后PRRS基因工程标记弱毒疫苗株提供候选标签蛋白，为PRRS疫苗株和野毒株的鉴别诊断提供技术支持。本发明应用于猪用疫苗及诊断领域。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一组猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒的抗原多肽及其多肽ELISA诊断试剂盒。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是猪的一种传染性病毒病，给全世界养猪业造成了巨大经济损失。因为发病猪耳部多发绀成蓝紫色，也被称为“蓝耳病”(Keffaber et al.,1989)。临床上主要表现为妊娠母猪的繁殖障碍以及各年龄阶段猪的呼吸障碍。1987年美国首次出现PRRS，随后该病在美国大范围流行并传播到加拿大等地区。随后欧洲及亚洲一些国家和地区也相继报道了该病(Albina et al.,1997)。1992年，世界动物卫生组织(OIE)将该病归类为B类传染病。我国于1996年郭宝清等首次在国内发现该病(郭宝清等,1996)，随后几年里该病在我国多个主要养猪省份均有报道。2006年，一种以发病急、传播快、高发病率和高死亡率为特征的高致病性PRRS(highly pathogenic PRRS,HP-PRRS)在我国南方暴发(Tian et al.,2007)，并迅速蔓延到我国各省份，导致大量生猪死亡，直接经济损失数十亿元。随后，高致病性PRRS成为我国的主流毒株，严重危害我国养猪业的健康发展。我国农业部将高致病性PRRS划归为一类传染病，作为重点防控疾病。

疫苗接种是防控该病的有效办法。截止到目前，市场上PRRSV疫苗的主要是弱毒疫苗和灭活疫苗，其中以弱毒疫苗为主。我国获批准生产的PRRS弱毒疫苗有很多种，包括CH-1R株、JXA1-R株、HuN4-F112株、TJM株、GDr180株和R98株等。弱毒疫苗在预防PRRS方面起到了积极的作用，而现有的血清学鉴别诊断方法无法区分疫苗免疫和野毒感染，给PRRS疾病的检测防控带来了巨大困难。因此研制一种能够在血清学上区分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程标记弱毒疫苗是当前情况下防控PRRS最佳选择。

近年来，反向遗传学技术的快速发展为标记疫苗的研究提供了重要的技术保障。在不影响病毒活性的前提下，通过删除疫苗株中具有良好免疫原性的多肽作为缺失标记，再以该多肽为包被抗原，通过血清学检测方法即可完成疫苗与野毒的鉴别诊断。因此，筛选出理想的抗原多肽，是PRRS基因工程标记弱毒疫苗研制的关键。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术问题，而提供一组猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原多肽的筛选及其应用。

本发明的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原多肽，所述的抗原多肽是由序列表中SEQID NO：1、SEQ ID NO：2中的一种或者两种所示的多肽组成的组合物。

进一步地，所述的SEQ ID NO：1所示的多肽为猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2蛋白第562-627位的氨基酸序列。

进一步地，所述的SEQ ID NO：2所示的多肽为猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2蛋白第749-813位的氨基酸序列。

本发明的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原多肽的应用，它用于制备ELISA诊断试剂盒。

进一步地，所述的ELISA诊断试剂盒包含猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原多肽作为抗原包被的酶联反应板、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标二抗、样品稀释液、洗涤液、底物显色液和终止液。