[发明专利]检测组织中tRF表达引物在制备喉癌辅助诊断试剂盒的应用

说明书

本发明涉及一种检测组织中tRF表达引物在制备喉癌辅助诊断试剂盒的应用，其特征在于：该tRF‑33‑Q1Q89P9L842205的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述tRF‑33‑Q1Q89P9L842205在喉癌患者组织中的特异性表达下调：所述引物为：F1：5’ATAAGCGCCGCTGGTGTAGTG 3'；R1：5’TATGGTTGTTGACGACTGGTTGAC 3’，与现有技术相比，本发明的优点在于喉癌组织中的特异性表达下调tRF‑33‑Q1Q89P9L842205可作为喉癌诊断的新型分子标记物。

技术领域

本发明涉及一种喉癌组织中tRNA衍生片段的检测方法，尤其涉及一种荧光染料法实时定量逆转录-聚合酶链式反应检测喉癌组织中tiRNA的方法及其应用。

背景技术

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，发病人群以40岁以上男性为主，且有年轻化趋势。近年虽有CO₂激光显微、机器人、放化疗联合等新技术应用于喉癌治疗，但其死亡率并未明显降低。主要由于这些技术大都只能使早期喉癌患者获益，而中晚期喉癌患者仍需喉全切或半切手术，术后常伴随喉功能丧失、频繁复发及转移等问题，严重危害人类健康【潘新良,林云.正确选择喉癌治疗方式、提高患者的生存率及生活质量[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2020,55(12):1111-1115.】。故早诊早治是降低喉癌死亡率、提高患者生存率及生活质量的最有效办法，早期喉癌如能及时治疗，不仅可保喉，其5年生存率可高达95％以上，但由于喉癌起病隐匿且缺乏早期特异性症状，多数患者就诊时往往处于中晚期【MengY,Bian L,Zhang M,Bo F,Lu X,Li D.Liquid biopsy and their application progressin head and neck cancer:Focus on biomarkers CTCs,cfDNA,ctDNA and EVs[J].Biomark Med.2020,14,1393-1404.】，与肝癌、前列腺癌等不同的是，喉癌尚缺乏如甲胎蛋白、前列腺特异抗原等特异性标志物作为辅助诊断，目前喉癌诊断的金标准为喉镜下组织活检，但存在创伤性大、取材困难、滞后性和部分患者不适合等缺点，无法实现广泛高效诊断。因此，寻找理想的喉癌标志物是实现其早诊早治的重要途经之一。

随着分子诊断研究的不断深入，科学家逐渐将目光转向tiRNA，因其有多种核苷酸(nucleotide，nt)修饰而结构稳定，且在肿瘤发生发展过程有重要功能而成为肿瘤标志物研究的新热点。它们是由血管生成素从成熟tRNA的反密码环处特异性切割产生的具有5'的羟基的小RNA，约为29～50nt，是一类广泛存在于真核生物细胞中的非编码小RNA分子。tiRNA可以分为5'tiRNA和3'tiRNA两个亚类，分别来自成熟tRNA的5'末端开始到反密码子环的末端、从反密码子环开始到成熟tRNA的3'末端【Zhu L,Ge J,Li T,Shen YJ,GuoJM.tRNA-derived fragments and tRNA halves:The new players in cancers[J].Cancer Lett.2019,452:31-37.】。tiRNA具有多种生物学功能，既可以在应激反应中作为信号分子，又可以作为基因表达的调节者，这些特点使得tiRNA在疾病诊断与治疗方法的开发应用上具有广阔的前景。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种检测组织中tRF-33-Q1Q89P9L842205表达的引物在制备喉癌辅助诊断试剂盒中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该检测组织中tRF-33-Q1Q89P9L842205表达的引物在制备喉癌辅助诊断试剂盒中的应用，其特征在于：该tRF-33-Q1Q89P9L842205的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述tRF-33-Q1Q89P9L842205在喉癌患者组织中的特异性表达下调：

所述引物为：

F1：5’ATAAGCGCCGCTGGTGTAGTG 3'；