[发明专利]一种检测2019-nCoV的CDA引物组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测2019‑nCoV的CDA引物组、试剂盒及其应用。所述CDA引物组为针对2019‑nCoV的S区片段扩增的引物组和/或N区片段扩增的引物组；其中，所述针对2019‑nCoV的S区片段扩增的引物组包括一对引物，分别为：S‑MF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，S‑MR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述针对2019‑nCoV的N区片段扩增的引物组包括一对引物，分别为：N‑MF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，N‑MR：其核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的试剂盒包括所述CDA引物组。本发明基于CDA技术，针对2019‑nCoV的2个特异保守区域分别设计2条引物。本发明提供的引物组敏感性高、特异性强，由其制成的试剂盒能够快速、准确的检测到待测样品中含有的2019‑nCoV。

技术领域

本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及一种检测2019-nCoV的CDA引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

2019-nCoV病原传播性强、传播迅速。在一项对41例疫情早期病例的临床研究发现，2019-nCoV患者进入ICU的重症患者占比率为31.7％，疾病总死亡率达到14.6％，对公共卫生安全造成极大的威胁。我国现已将其归为乙类法定传染病，并归为甲类传染病管理。

因目前尚无特效治疗药物，对于该疾病的防控则仍显得极为重要。而对于该病毒的快速、特异、高灵敏的诊断则为防控中的重要一环。我国卫健委发布的诊疗手册将基于RT-PCR指定为2019-nCoV病毒检测的确诊指标。但应用RT-PCR方法，需要在标准生化分析实验室中使用精密的实时荧光PCR仪，并需要试剂准备、标本制备和PCR扩增检测三个独立的实验区，不适合用于现场快速筛查。而免疫检测技术所制成的试纸条具有简便快捷的优势，但该方法误检率较高、灵敏度较低，难于检测处于潜伏期的2019-nCoV携带者，可能造成疫情的扩散。因此，面向现场的快速、灵敏、高特异性核酸标志物检测技术研发将为2019-nCoV防控提供强有力的保障。

基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增技术(Closed Dumbbell mediatedIsothermal Amplification of nucleic acids，CDA)是中国科学院大学宁波生命与健康产业研究院研发的替代日本LAMP的核酸恒温扩增方法，具体参见申请号为202110473121.8的专利。该方法主要利用2至6种不同的特异性引物识别靶基因的特定区域，在等温条件进行扩增反应。与常规基因检测手段(如PCR等)相比，CDA反应在恒温水浴箱便可完成，仪器设备要求低，较传统PCR和培养法操作简单许多，不需要专业人士也可准确完成，适合基层医疗机构及地方检验检疫部门的应用。并且，CDA还可以大大缩短操作时间，减少样品污染机会，适合应用于2019-nCoV的快速诊断。此外，CDA所用关键成环引物约为30bp，较LAMP中成环引物40bp短，这将极大节省成本。

发明内容

本发明的目的是，提供一种检测2019-nCoV的CDA引物组、试剂盒及其应用。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案如下：

一种非疾病诊断目的的检测2019-nCoV的CDA引物组，所述CDA引物组为针对2019-nCoV的S区片段扩增的引物组和/或N区片段扩增的引物组；其中，所述针对2019-nCoV的S区片段扩增的引物组包括一对引物，分别为：S-MF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，S-MR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示；其中，所述针对2019-nCoV的N区片段扩增的引物组包括一对引物，分别为：N-MF：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，N-MR：其核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

本发明还提供一种检测2019-nCoV的试剂盒，所述试剂盒包括上述的CDA引物组。

作为优选实施方案，所述CDA引物组中各引物S-MF、S-MR、N-MF、N-MR在反应体系中的浓度均为1～2μM。