[发明专利]一种海水样本宏基因组建库检测技术有效
| 申请号： | 202110808273.9 | 申请日： | 2021-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN113528615B | 公开（公告）日： | 2023-05-23 |
| 发明（设计）人： | 孙晓玥;王汐月;吴森;邢志凯;王绪敏;曲江勇;王丽君;刘秀梅 | 申请（专利权）人： | 烟台大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 朱宝莉 |
| 地址： | 264003 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 海水 样本 宏基 组建 检测 技术 | ||
1.一种海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，包括：滤膜的前处理、过滤步骤、Tn5转座子构建文库；所述的滤膜的前处理为使滤膜带有正电荷；所述的滤膜的前处理为使用含有壳聚糖的处理液处理滤膜；所述的处理液中壳聚糖的含量为2.0mg/mL；所述的滤膜的孔径为0.45μm；
所述的Tn5转座子构建文库的方法为：利用FireSeq-转座法DNA建库试剂盒进行文库的构建。
2.根据权利要求1所述的海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，所述的滤膜的前处理为使滤膜浸泡在含有壳聚糖的处理液中；或者将含有壳聚糖的处理液喷涂到滤膜表面。
3.根据权利要求1所述的海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，所述的过滤步骤中使用的过滤装置带有紧贴于滤膜的搅拌装置。
4.根据权利要求1所述的海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）用含有壳聚糖的处理液处理滤膜，清除多余处理液后烘干；
（2）水样抽滤，抽滤完成后用裂解液覆盖滤器，冻存；
（3）步骤（2）样品解冻后，添加溶菌酶；
（4）添加蛋白酶K、十二烷基硫酸钠后封闭孵育；
（5）萃取；
（6）超滤收集水相，提取DNA；
（7）Tn5转座子构建文库；
（8）上机测序。
5.根据权利要求4所述的海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，所述的步骤（2）中的裂解液中的成分及用量为：50 mM Tris-HCl，40 mM EDTA，0.75M蔗糖。
6.根据权利要求4所述的海水样本宏基因组建库检测方法，其特征在于，所述的步骤（8）中包括：DNA与流动槽的附着，桥式PCR，解链切除，测序。
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