[发明专利]一种小分子荧光探针及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)：中间体2的制备：将5-氨基-1-萘酚或6-氨基-1-萘酚和二碳酸二叔丁酯置于圆底烧瓶中，加入四氢呋喃溶剂溶解，后再加入碳酸氢钠固体，室温下搅拌反应，TLC检测反应进程，反应结束后减压蒸除四氢呋喃溶剂后加入蒸馏水，待固体析出后过滤、洗涤，得到

中间体2

(2)：中间体3的制备：圆底烧瓶使用前经充分干燥，并用氮气吹扫，加入磁子，迅速加入氢化钠和中间体2，塞好橡皮塞，充入氮气保护，0℃冰浴冷却，加入干燥DMF，搅拌后缓慢滴加碘代烷烃，TLC检测反应进程，反应结束后，加入蒸馏水淬灭反应，乙酸乙酯萃取，合并有机层，水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除溶剂得粗品，再经硅胶柱层析得中间体3所述碘代烷烃为C₁-C₈碘代烷烃；所述R₁为C₁-C₈烷基；

(3)：中间体5的制备：圆底烧瓶中加入中间体4和新鲜蒸馏的氯化亚砜，加入适量DMF，加热回流，反应结束后回收未反应的氯化亚砜，乙酸乙酯重结晶得中间体5所述R₂为甲基或乙基；

(4)：中间体6的制备：圆底烧瓶中加入中间体3、DMAP和三乙胺，加入二氯甲烷溶解，冷却至0℃，将中间体5溶于二氯甲烷中，缓慢滴加入圆底烧瓶中，反应结束后，加入蒸馏水，乙酸乙酯萃取，合并有机层，水洗、盐洗，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸除有机溶剂得中间体6

(5)：中间体7的制备：圆底烧瓶中加入中间体6和三氯化铝，再加入溶剂溶解，加热反应，反应结束冷却至室温后，过滤除去三氯化铝，滤液蒸干，经硅胶柱层析得纯品中间体7

(6)：中间体8的制备：圆底烧瓶中加入中间体7，将其溶解于THF中，依次加入硼氢化钠和三氯化铝，回流反应，反应结束后冷却至室温，加适量水后用乙酸乙酯萃取，水洗、盐洗、无水硫酸钠干燥后减压蒸除乙酸乙酯得中间体8

(7)：中间体9的制备：圆底烧瓶中加入发烟硫酸和中间体8，加热反应，结束后冷却至室温，加入大量冰水，用氢氧化钠水溶液调节pH值至中性，过滤，水洗得中间体9

(8)：目标产品的制备：圆底烧瓶中加入中间体9，加入甲醇溶解，再加入DDQ搅拌反应，TLC检测反应进程，反应结束后减压浓缩，加入DCM，过滤，滤液浓缩后经硅胶柱层析得目标产品其中，取代基-NH-R₁位于苯环的5位或6位。

2.根据权利要求1所述的小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述溶剂为甲苯，加热反应温度为135-145℃。

3.根据权利要求1所述的小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(7)中，所述加热反应温度为75-85℃。

4.根据权利要求1所述的小分子荧光探针的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述碘代烷烃为碘代甲烷、碘代乙烷、碘代丙烷、碘代异丁烷、碘代异戊烷。