[发明专利]一种用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针以及试剂盒

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，具体公开一种用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针以及试剂盒。所述引物的序列为：上游引物：5′‑TTGCCCTTGGAGTTCGACTAAC‑3′；下游引物：5′‑GCAGCTGTTGCGATTAGTTGAA‑3′；所述探针的序列为：5′‑CCAACCTTACAGCCGGCCACCTTC‑3′。本发明设计的用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针能够快速准确的从所有亲缘近似种和生态近似种中检测出日本鲭，检测方法具有特异性好、灵敏度高和简单快捷等优势，对日本鲭的准确快速鉴别和食品安全保障具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其涉及一种用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针以及试剂盒。

背景技术

日本鲭是一种很常见的可食用鱼类，其蛋白质含量较高，在我国沿岸、朝鲜及日本海域等海洋渔业中占据重要地位。但是，日本鲭高蛋白含量中的组氨酸占比较高，若其离开水面没有尽快食用，或者经过上时间的运输后，体内会大量繁殖沙门氏菌、链球菌等细菌，进而将鱼肉内的组氨酸转化为有毒的组胺，而食入高组胺鱼肉后常会引起过敏，多表现为颜面或全身皮肤潮红、结膜充血、头晕、口干、心悸、四肢无力等症状，常被人们俗称为“组胺中毒”。因此，选择日本鲭的食用时间非常重要。

日本鲭与澳洲鲭为近种，通过其形貌很难区分，若是加工处理后则更是难以辨别。同时，日本鲭经过加工处理后其肉质与鳕鱼、罗非鱼、巴沙鱼、金枪鱼、鲤鱼、三文鱼、低眼巨鲶、虹鳟、大马哈鱼和鲶鱼也极难区分，为了保证食品安全，避免长时间不正规储存的加工日本鲭鱼肉出现在市场上或者冒充其它鱼种，研究快速辨别日本鲭的方法非常关键。因通过外形较难区分日本鲭，目前的研究人员开始开发从分子水平进行鉴别方法。由于日本鲭与其它同科物种的基因序列同源性较高，根据其基因组设计具有特异性的扩增引物和探针较为困难。目前研究人员通过DNAMAN软件大量比对分析相同物种的基因组序列，选取其它同科物种与日本鲭基因组DNA的差异序列来设计引物，但是到目前为止，公开的现有技术中均未找到一组可以在澳洲鲭、鳕鱼、罗非鱼、巴沙鱼、金枪鱼、鲤鱼、三文鱼、低眼巨鲶、虹鳟、大马哈鱼、鲶鱼和日本鲭中能特异性的扩增并鉴别出日本鲭的引物。

发明内容

针对现有日本鲭的鉴别方法存在的上述技术问题，本发明提供一种用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针以及试剂盒，该用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针可以特异性的在众多近种鱼类中鉴别出日本鲭，并且具有较高的灵敏度，在日本鲭的鉴别方法中具有重要的应用价值。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针，所述引物的序列为：

上游引物：5′-TTGCCCTTGGAGTTCGACTAAC-3′；

下游引物：5′-GCAGCTGTTGCGATTAGTTGAA-3′；

所述探针的序列为：5′-CCAACCTTACAGCCGGCCACCTTC-3′。

相对于现有技术，本发明提供的用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针具有特异性高和灵敏度好的优势。用所述引物和探针对日本鲭以及日本鲭的11种亲缘近似种和生态近似种(鳕鱼、罗非鱼、巴沙鱼、金枪鱼、鲤鱼、三文鱼、低眼巨鲶、虹鳟、大马哈鱼、鲶鱼和澳洲鲭)的基因组DNA进行实时荧光PCR扩增检测，该实时荧光PCR检测用引物和探针只能在含有以日本鲭的基因组DNA为模板的体系中得到扩增产物，其他亲缘近似种和生态近似种都无法得到扩增产物，即通过实时荧光检测结果就可直观判断出检测的样品是否为日本鲭。因此，通过本发明设计的用于检测日本鲭的实时荧光PCR引物和探针能够快速准确的从众多日本鲭亲缘近似种和生态近似种中检测出日本鲭，检测方法简单快捷，对日本鲭的准确快速鉴别和食品安全保障具有重要的意义。

优选的，所述探针的5′连接有荧光基团，所述探针的3′端连接有淬灭基团。