[发明专利]一种高敏感性和特异性强的日本血吸虫检测引物、探针、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于日本血吸虫检测的LFD-RPA诊断试剂盒，所述的试剂盒包括一对特异性引物和一个nfo探针，核苷酸序列如下：

RPA-F: 5'-CCGAACACTTCAAGGAACAGTTTAGCTGGC-3'（SEQ ID NO.1）

RPA-R: 5'-CTTCGTCGTTTCAGGTTAGATATAGCTTTTTG-3'（SEQ ID NO.2）

RPA-P:5'-ATTACCCAGCTTTTCCACTCAAGCTAAATGAACATTGAAG

TAGGC-3'（SEQ ID NO.3）。

2.根据权利要求1所述的用于日本血吸虫检测的LFD-RPA诊断试剂盒包括：

RPA-F/R(10 μM)：2.1 μl

TwistAmpnfo probe (10 μM)：0.6 μl

Primer Free Rehydration buffer：29.5μl

Betaine（5M）：5 μl

DNA模板：1 μl

ddH₂O：7.2 μl

MgOAc (280mM)：2.5μl。

3.根据权利要求1或2所述的用于日本血吸虫检测的LFD-RPA诊断试剂盒扩增反应条件如下：

39℃反应15 min，反应产物稀释20倍后用LFD检测。

4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒在非诊断目的的检测日本血吸虫中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用具体是：用试剂盒中的一对特异性引物和nfo探针，对待测样本中提取的DNA进行RPA反应，通过LFD对扩增产物进行分析，当同时出现检测线和质控线时，认为扩增出了目的片段，该样本判为阳性。

6.一种非诊断目的的日本血吸虫的LFD-RPA检测方法，检测方法包括如下步骤：

从待测样本中提取DNA，以DNA为模版，将权利2中所有成分同时加入RPA反应体系，进行RPA反应；

用LFD对RPA扩增产物进行分析，若扩增出目的片段，则待测样本为阳性。