[发明专利]一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法

说明书

本发明涉及一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，将生物材料填塞于软骨环中，经培养后，检测WST和DNA含量。此方法对I型胶原蛋白生物材料和II型胶原蛋白生物材料均适用。

技术领域

本发明涉及一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法。

背景技术

膝关节软骨缺损是常见的运动性损伤，由于软骨自身修复的能力及其微弱，软骨组织无血管，软骨细胞不能迁移到需要修复的区域。目前临床上采用的MACI技术（基质诱导的自体软骨细胞移植技术），取患者膝关节腔非受力面软骨细胞接种到生物膜上培养后，再将带有活细胞的生物膜植入体内软骨缺损部位，达到软骨修复的目的。生物膜植入体内后会诱导软骨细胞迁移生长，不同的生物膜迁移效果不尽相同，效果不好的会延迟病人的术后康复期，给患者造成生活上的不便和心理焦虑。

目前尚未有在体外针对生物材料的对周边软骨细胞诱导迁移性的评估方法。

发明内容

本发明提供一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，解决技术问题是评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，将生物材料填塞于软骨环中，经培养后，检测WST和DNA含量；

所述软骨环按照以下步骤进行：

软骨剔取：选择新鲜的健康猪后腿，打开股骨和胫骨之间的关节腔，选取股骨关节中

的软骨，在生物安全柜内，剔取若干个边长为0.9～1.1cm的软骨方块；

软骨环制备：用直径0.7～0.9cm的打孔器将软骨方块打成圆形软骨，用直径0.6cm的打

孔器在圆形软骨上钻孔，得环径为0.1～0.3cm的软骨环；至少制取18个软骨环；

产品裁切与填塞：将生物材料裁剪成直径为0.7cm，圆形材料；将所得圆形材料填塞于所

制备的软骨环中；

摇培：取24孔细胞培养板，每孔铺500μl琼脂糖，并放入1.5mL CC培养基，将软骨环

放入孔中，至少做3个平行；将细胞培养板置于CO₂培养箱中摇培；

表征测定：分别摇培7天、14天和18天后，分别测定WST与DNA含量，每项各测定3片。

所述所述CC培养基是以1000ml计，DMEM10.0275g、碳酸氢钠2.775g、血清200ml、双抗10ml、维生素C液5ml、脯氨酸液4ml、非必需氨基酸液10ml、4-羟乙基哌嗪乙磺酸液10ml和丙酮酸钠液10ml，余量为纯化水。

所述摇培条件为CO₂浓度为5%，温度为37℃，转速为 55rpm。

摇培时需每天观察培养基颜色，若培养基变色发黄，则更换培养基。

所述股骨关节中的软骨是股骨关节中滑车、内侧髁和外侧髁中的一种或几种。

所述维生素C液配制方法为：称取1g维生素C，加入100mlDMEM溶液，定容至100ml，即得维生素C溶液；

所述脯氨酸液配制方法为：称取1.15g脯氨酸，加入100mlDMEM溶液，定容至100ml，即得脯氨酸液。

发明具有以下有益技术效果：

本发明制备的猪软骨环能很好的模拟人体股骨软骨组织，通过体外培养以及后期的检测可以有效评估生物膜的诱导迁移效果，可以为软骨修复在生物材料的筛选上提供有效的手段，为患者治疗带来更安全和更高效的保障。