[发明专利]一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法

权利要求书

1.一种评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，将生物材料填塞于软骨环中，经培养后，检测WST和DNA含量；所述软骨环按照以下步骤进行：软骨剔取：选择新鲜的健康猪后腿，打开股骨和胫骨之间的关节腔，选取股骨关节中的软骨，在生物安全柜内，剔取若干个边长为0.9～1 .1cm的软骨方块；软骨环制备：用直径0 .7～0 .9cm的打孔器将软骨方块打成圆形软骨，用直径0 .6cm的打孔器在圆形软骨上钻孔，得环径为0.1～0.3cm的软骨环；至少制取18个软骨环；产品裁切与填塞：将生物材料裁剪成直径为0 .7cm的圆形材料；将所得圆形材料填塞于所制备的软骨环中；摇培：取24孔细胞培养板，每孔铺500μl琼脂糖，并放入1 .5mL CC培养基，将软骨环放入孔中，至少做3个平行；将细胞培养板置于CO₂培养箱中摇培；表征测定：分别摇培7天、14天和18天后，分别测定WST与DNA含量，每项各测定3片；

所述WST是通过酶标仪测的吸光度值的结果；

检测WST时需要加入CCK-8试剂；

所述DNA是存在于细胞中的遗传物质。

2.如权利要求1所述的评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，所述所述CC培养基是以1000ml计，DMEM10 .0275g、碳酸氢钠2 .775g、血清200ml、双抗10ml、维生素C液5ml、脯氨酸液4ml、非必需氨基酸液10ml、4-羟乙基哌嗪乙磺酸液10ml和丙酮酸钠液10ml，余量为纯化水。

3.如权利要求1或2所述评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，所述摇培条件为CO₂浓度为5%，温度为37℃，转速为 55rpm。

4.如权利要求1或2所述评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，摇培时需每天观察培养基颜色，若培养基变色发黄，则更换培养基。

5.如权利要求1或2所述评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，所述股骨关节中的软骨是股骨关节中滑车、内侧髁和外侧髁中的一种或几种。

6.如权利要求2所述评估生物材料对周边软骨细胞诱导迁移性的方法，其特征在于，所述维生素C液配制方法为：称取1g维生素C，加入100mlDMEM溶液，定容至100ml，即得维生素C溶液；所述脯氨酸液配制方法为：称取1.15g脯氨酸，加入100mlDMEM溶液，定容至100ml，即得脯氨酸液。