[发明专利]犬轮状病毒单克隆抗体对及其应用

说明书

本发明提供了具有特异性结合犬轮状病毒VP7蛋白的鼠单克隆抗体对：单克隆抗体4A5和单克隆抗体2C12，其制备的胶体金检测试剂盒能高灵敏度的检测多种犬轮状病毒流行株和标准株，与RT‑PCR检测方法符合率高，且能对不同地域的流行株和靶标检测，具有快速、简便、准确的优势，能满足现阶段临床上的迫切需求。

技术领域

本发明涉及犬轮状病毒单克隆抗体，分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，以及含单克隆抗体对的双抗体夹心检测试剂盒和应用，属于生物技术领域。

背景技术

犬轮状病毒(Canine ratavirus,简称CRV)在分类上属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属，核酸型为双股RNA。该病主要侵害幼犬，以腹泻症状为特征的急性接触性传染病，多发于秋冬季,尤其是晚冬至早春的寒冷季节。CRV主要存在于小肠黏膜上皮细胞，在肠系淋巴结皮质和副皮质区的网状细胞内也可见到。传播途径以消化道为主，含毒粪便污染用具和周围环境而使健康犬发生感染。传染来源主要是病犬和隐性带毒犬，CRV通常引起幼犬严重感染，成年犬多呈亚临床感染。幼犬常发生严重腹泻，伴有水样至黏液样粪便。但食欲和体温无大变化。病初精神沉郁，食欲减退，不愿走动，被毛粗乱，肛门周围皮肤被粪便污染。一般先吐后泻，粪便粘液或水样，呈黄、白、灰等不同颜色，严重者排血便，严重脱水，体温降低，心跳加快，常以死亡告终。目前无有效的犬轮状病毒疫苗和特效药，此类疾病因抗生素、磺胺类等抗生素对其无效，临床上主要采用维持电解质平衡、纠正酸碱紊乱等对症治疗方法，效果不明显。又因不同疾病引起的腹泻在临床表现特征、疾病流行方式上十分相似,使此类疾病的临床鉴别诊断十分困难。

CRV病原学检测方法包括病毒分离法、电镜观察、免疫荧光法、RT-PCR试验。目前，市售的诊断试剂有RT-PCR、荧光定量PCR以及胶体金检测试纸条。前两种产品隶属于核酸诊断范畴，灵敏度高，但操作繁琐，仪器昂贵，对设备及人员技能要求均较高，适用于成熟的实验室检测，不适用于该病毒的现场快速检测。免疫胶体金检测技术虽然比较成熟，但影响检测结果的因素众多，与抗原抗体分子量、浓度，金颗粒的用量，检测样本的特点及样本中存在的干扰物质等有主要关系，严重影响检测的灵敏度和特异性。因此，亟待建立一种灵敏度高、快速、准确、简便有效的CRV诊断方法。同时，临床上可能存在不同时期的流行株混合感染，因此需要建立针对不同时期的流行株均能高灵敏度检测的CRV诊断方法。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一对能特异性结合犬轮状病毒的单克隆抗体，以及含单克隆抗体对的胶体金检测试纸条及其应用。

本发明涉及特异性结合犬轮状病毒的VP7蛋白的单克隆抗体。

本发明涉及与不同时期的犬轮状病毒流行株能特异性结合的单克隆抗体。

本发明还涉及高灵敏度、良好特异性、重复性良好地检测犬轮状病毒的试剂盒。

本发明还涉及常温条件下长保存期的犬轮状病毒检测试剂盒。

本发明还涉及能高灵敏度检测不同时期的犬轮状病毒流行株的试剂盒。

本发明还涉及能对不同地域的犬轮状病毒流行株进行高灵敏度检测的试剂盒。

本发明还涉及检测犬轮状病毒抗原的消长规律与RT-PCR方法检测相符的试剂盒。

本发明还涉及能与犬轮状病毒具有良好反应特性的单链抗体。

本发明还涉及能与不同时期的犬轮状病毒流行株具有良好反应特性的单链抗体。

具体实施方式

定义