[发明专利]一组检测核酸的HCR-DNAzyme探针及其应用

权利要求书

1.一组检测核酸的HCR-DNAzyme探针，包含探针H1、探针H2和底物链H3；

所述探针H1从5’到3’依次包括：A序列、B序列和C序列；

所述C序列与目标核酸互补；

所述B序列为任意4～6个碱基组成的序列；

所述A序列与C序列的5’端互补；

所述探针H2从5’到3’依次包括：D序列、E序列、F序列、G序列、H序列和I序列；

所述D序列为AAACCGAGGCTAGC(SEQ ID NO.8)；

所述E序列和所述H序列为一个碱基，所述E序列和所述H序列互补；

所述F序列与所述A序列和B序列连接而成的序列互补；

所述G序列与C序列互补；

所述I序列为TACAACGACGCCTGC(SEQ ID NO.9)；

所述底物链H3从5’到3’依次包括：G序列、J序列和K序列；

所述J序列为CG/rA//rU/CGGTTT(SEQ ID NO.10)，其中，rA为腺嘌呤核苷酸，rU为尿嘧啶核苷酸；

所述K序列与G序列的5’端互补。

2.根据权利要求1所述的HCR-DNAzyme探针，其特征在于：

所述探针H1上修饰有第一荧光基团，所述探针H2上修饰有第二荧光基团，且所述第一荧光基团与所述第二荧光基团之间能发生荧光共振能量转移。

3.根据权利要求2所述的HCR-DNAzyme探针，其特征在于：

所述第一荧光基团为Cy3，所述第二荧光基团为Cy5；或

所述第一荧光基团为Cy5，所述第二荧光基团为Cy7；或

所述第一荧光基团为Cy3，所述第二荧光基团为Alexa488；或

所述第一荧光基团为Rhodamine，所述第二荧光基团为FITC。

4.根据权利要求3所述的HCR-DNAzyme探针，其特征在于：

所述核酸为miR-1246时，

所述探针H1的序列为：5’-ATTTTTGGAGCAGGCACACCCTGCTCCAAAAATCCATT-3’(SEQ IDNO.1)；

所述探针H2的序列为：5’-AAACCGAGGCTAGCCGTGTGCCTGCTCCAAAAATAATGGATTTTTGGAGCAGGGTACAACGACGCCTGC-3’(SEQ ID NO.2)；

所述底物链H3的序列为：5’-AATGGATTTTTGGAGCAGGCG/rA//rU/CGGTTTTCCAAATATCCATT-3’(SEQ ID NO.3)。

5.一种检测核酸的纳米片，包含：权利要求1～4中任一项所述的HCR-DNAzyme探针和MnO₂纳米片。

6.根据权利要求5所述检测核酸的纳米片，其特征在于：

所述MnO₂纳米片的制备方法如下：将四甲基氢氧化铵和H₂O₂的混合溶液与可溶性锰盐混合，搅拌，固液分离，得到沉淀，即为MnO₂纳米片。

7.权利要求5～6中任一项所述检测核酸的纳米片的制备方法，取权利要求1～4中任一项所述的HCR-DNAzyme探针和MnO₂纳米片混合，加入缓冲液，混合，得到纳米片。

8.一种试剂盒，包含：权利要求1～4中任一项所述的HCR-DNAzyme探针和/或权利要求5～6中任一项所述检测核酸的纳米片。

9.(1)～(3)中任一种产品在非疾病诊断用途的核酸检测中的应用；

(1)权利要求1～4中任一项所述的HCR-DNAzyme探针；

(2)权利要求5～6中任一项所述检测核酸的纳米片；

(3)权利要求8所述的试剂盒。

10.一种非疾病诊断用途的核酸检测方法，所述核酸检测方法为S1或S2，

S1：

将权利要求1～4中任一项所述的HCR-DNAzyme探针、缓冲液、锰离子、镁离子和待测核酸混合，35～50℃下孵育2～6h，测定荧光信号强度；

S2：

将权利要求5～6中任一项所述检测核酸的纳米片和包含待测核酸的细胞混合，35～50℃下孵育2～6h，观察荧光强度。