[发明专利]一种基于酵母细胞表面展示技术的爆炸物可视化生物传感器及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于酵母细胞表面展示技术的爆炸物可视化生物传感器，其特征在于，所述爆炸物可视化生物传感器中含有锚定蛋白的编码基因和爆炸物可视化的目标基因；所述爆炸物可视化的目标基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示或SEQ ID NO.6所示；所述锚定蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；将两种含有不同目标基因的爆炸物可视化生物传感器混合使用。

2.权利要求1所述的爆炸物可视化生物传感器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）克隆爆炸物可视化的目标基因DntA或DntB基因；

（2）克隆锚定蛋白的编码基因，通过遗传操作插入酵母的表达载体中，获得含有锚定蛋白基因的表达载体；

（3）将克隆的DntA或DntB基因通过遗传操作分别插入步骤（2）中含有锚定蛋白基因的表达载体中，获得DntA或DntB酵母细胞表面展示表达重组载体；

（4）将所述DntA或DntB酵母细胞表面展示表达重组载体转化酵母感受态细胞，筛选阳性转化子，获得含有DntA或DntB展示系统的酵母工程菌株；

（5）将所述含有DntA或DntB展示系统的酵母工程菌株活化培养后，洗涤收集菌体，获得具有DntA或DntB酶活性的全细胞催化剂，即为爆炸物可视化生物传感器；将两种含有不同目标基因的爆炸物可视化生物传感器混合使用。

3.权利要求1所述的爆炸物可视化生物传感器在用于爆炸物分子实时检测中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述爆炸物可视化生物传感器的使用方法是：将所述爆炸物可视化生物传感器加入待测样品中，20℃反应1 h后，肉眼观察培养液颜色，若此时显示红色则确定样品中含有爆炸物分子，且红色越深则爆炸物分子的浓度越高；然后离心终止反应，利用全细胞全波长分光光度计在420 nm处检测吸光值，根据标准曲线计算得出爆炸物分子的浓度，吸光值越大则爆炸物分子的浓度越高。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，混合使用时，将含有DntA和DntB基因的所述爆炸物可视化生物传感器以1:10-10:1的体积比混合。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述爆炸物可视化生物传感器能够检测到的爆炸物分子浓度的线性范围为0.0005 mg/L-1mg/L，最低检测限是0.0005 mg/L。