[发明专利]用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法

说明书

本发明属于医学检测技术领域，公开了一种用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法，对样品进行收集，并对样品进行处理，筛选出严重少精症、无精症的特异性标志物；睾丸组织层面，利用芯片方法筛选正常男性和不育男性睾丸组织中差异microRNA的表达；精浆层面，用蛋白组学方法寻找正常男性和不育男性的差异标记蛋白；尿液层面，利用代谢组学，筛选正常男性和不育男性尿液中代谢产物的差异；整合从睾丸组织层面、精浆层面和尿液层面三个高通量层面获得数据，将这些数据进行与精子质量、密度、活力之间的关联分析；诊断技术优化和建立。本发明检测耗时长、效率高且能解释患者生精障碍的原因。

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，尤其涉及一种用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法。

背景技术

目前，临床大部分无精子症和严重少精子症患者生精障碍的病因未明，给临床治疗带来极大困惑。因此，目前亟需对不明原因生精障碍的机制进行系统研究，筛选无精子症和严重少精子症特异性标志物，研发相关快速检测技术，为男性不育患者临床快速准确分型和个性化治疗提供依据，减少无效或不必要的检查与治疗。现阶段相关技术国内外发展现状为：无精子症和严重少精子症的临床检测方法主要有染色体核型分析和AZF微缺失检测，但这两项技术检测耗时长、效率低且仅能解释少数患者(5％-15％)生精障碍的原因。近年来国内外研究发现microRNA和精浆蛋白质等分子与生精障碍密切相关，但尚未有无精子症和严重少精子症特异性标志物和相关检测技术的系统研究。

现如今，Y染色体微缺失已经成为无精子症和少精子症不育患者的常规检测项目。但AZF片段较小，常规核型分析不易发现其缺失，通过Y染色体特异性序列标签位点(STSs)的引物进行PCR扩增可检测出光镜下分辨不出的Y染色体微缺失，并具有简单、快速、灵敏、特异性强的特点。

目前检测中，常用的序列标签位点主要包括sY84、sY86(AZFa)；sY127、sY134(AZFb)；sY254、sY255(AZFc)等，经过PCR扩增后凝胶电泳或杂交等方法检测。传统凝胶电泳，耗时，耗力，且存在污染性。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术检测耗时长、效率低且仅能解释少数患者生精障碍的原因。

解决以上问题及缺陷的意义为：本发明可找到不明原因严重少精子症和无精子症患者生精障碍的病因，为完善精子发生机制提供依据，严重少精子症和无精子症特异性标志物快速检测试剂盒可提高临床检测效率和准确性，节省大量时间、人工和能源，降低传统方法重复检测给患者带来的经济压力，利于临床病例的快速准确分型和个性化辅助生育方案的制定，避免无谓的检查和治疗。因此，具有较强的市场竞争优势和广阔应用前景。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法。

本发明是这样实现的，一种用于无精子症和严重少精子症检测的特异性标志物筛选方法包括：

利用microRNAs芯片、蛋白组和代谢组三种高通量技术筛选男性严重少精症、无精症特异性标志物，借助real-time PCR和ELISA技术获得real-time试剂盒和ELISA快速诊断试剂盒。

本发明的另一目的在于提供一种real-time试剂盒和ELISA快速诊断试剂盒，所述real-time试剂盒和ELISA快速诊断试剂盒包含用途中的特异性标志物。

本发明的另一目的在于提供一种包含用途中的特异性标志物在无精子症和严重少精子症数据信息检测中的应用，所述应用包括：

步骤一，对样品进行收集，并对样品进行处理，筛选出严重少精症、无精症的特异性标志物；