[发明专利]一种基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒至少包含LAMP比色缓冲液、dNTPs、Bst2.0 DNA聚合酶和逆转录酶。

2.根据权利要求1所述的基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒，其特征在于，所述LAMP比色缓冲液包括20mM(NH₄)₂SO₄、100mMKCl、16mMMgSO₄、0.2％Tween-20、1mMKOH和5mM酚红染料。

3.根据权利要求1或2所述的基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒，其特征在于，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP各5mM。

4.根据权利要求1至3任一项所述的基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒，其特征在于，所述Bst2.0 DNA聚合酶浓度为8U/μL。

5.根据权利要求1至4任一项所述的基于恒温扩增的比色核酸检测试剂盒，其特征在于，所述逆转录酶浓度为等于或大于8U/μL。

6.一种基于恒温扩增的比色核酸检测方法，其特征在于，使用根据权利要求1至5任一项所述的核酸检测试剂盒，利用环介导等温扩增技术(LAMP)特异性扩增目标核酸，再利用pH敏感染料将核酸扩增引起的pH变化转化为溶液由红到黄颜色的改变。

7.根据权利要求6所述的比色核酸检测方法，其特征在于，所述检测方法的反应体系如下：

8.根据权利要求7或8所述的比色核酸检测反应体系，其特征在于，所述LAMP扩增引物根据需检测的核酸来设计，其中引物参考浓度如下：

FIP/BIP primers 16mM

F3/B3 primers 2mM

Loop F/B primers 4mM

9.根据权利要求7所述的比色核酸检测反应体系，其特征在于，所述逆转录酶只在待测样本是RNA时加入。

10.根据权利要求6—7所述的比色核酸检测方法，其特征在于，所述核酸检测方法包括如下步骤：

(1)依次将12.5μLLAMP比色缓冲液、7μLdNTPs、2.5μL根据目标核酸设计的LAMP扩增引物加入反应管。

(2)在反应管内加入1μLBst2.0 DNA聚合酶，如果待测样本是RNA，再加入1μL逆转录酶。

(3)在反应管内加入2μL待测样本溶液，充分混匀后65℃恒温加热30min。

(4)反应结束后观察反应管内溶液颜色，若溶液变黄，说明待测样本中含有目标核酸；若溶液保持红色，说明待测样本中不含目标核酸。