[发明专利]α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法

说明书

本发明涉及一种α‑葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，包括下列步骤：饲养斑马鱼直至状态稳定；将所述斑马鱼投入3％葡萄糖水中养殖2～6天，确定得高血糖斑马鱼模型；在所述3％葡萄糖水中再加入杨梅苷，饲养所述高血糖斑马鱼模型若干天后，测定所述高糖斑马鱼模型的肠道样品中α‑葡萄糖苷酶的酶活力。本发明提供的α‑葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法可通过人工饲养的高糖斑马鱼模型进行，高糖斑马鱼模型构建效率高，能够节省时间成本和经济成本，也能够成功评价a‑葡萄糖苷酶抑制剂类降血糖物质的体内降血糖活性，以及用于评价a‑葡萄糖苷酶抑制剂在体内降低肠道酶活力的性能，操作方便难度低。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法。

背景技术

据国际糖尿病联盟2019年发布的最新数据显示，2019年全球糖尿病患者人数约4.63亿，预计糖尿病患者人数还会逐年攀升。其中我国糖尿病患者人数在世界各国中位居榜首，2型糖尿病患者人数约占我国总糖尿病患者人数的90％。α-葡萄糖苷酶抑制剂是通过抑制小肠黏膜刷状缘的α-葡萄糖苷酶以延缓碳水化合物的吸收，降低餐后高血糖，可以用于治疗部分2型糖尿病患者。

发掘植物源的α-葡萄糖苷酶抑制剂需经过体外和体内评价，体外评价方法十分成熟，而现有体内评价方法95％以上均采用小鼠动物模型，该模型周期长，养殖成本高和养殖场所要求苛刻，十分不利于α-葡萄糖苷酶抑制剂的体内评价。

斑马鱼属于辐鳍亚纲鲤科短担尼鱼属，其基因与人类基因同源性高达87％。其胰腺的结构和功能以及参与血糖调节的相关组织器官与哺乳动物相似度高，具有一定的保守性。其繁殖速度快、个体小、可活体观察组织等优点使其作为模式生物在糖尿病研究中得到了应用。

现有技术中，如一种II型糖尿病斑马鱼模型的构建方法及应用，申请号CN201911005040.4，虽然提供了一种斑马鱼模型，但构建转基因斑马鱼，部分实验室由于实验条件限制无法实现，普适性不太高。构建过程较复杂，存在一定的风险。另外，采用药物对转基因斑马鱼进行造模，药物的使用量对模型构建成功是否会产生影响并未进行相关说明。再者，含有硝基基团的化合物具有一定的诱变性和遗传毒性，在造模过程中除了发挥诱导杀死胰腺组织细胞的作用外，可能对斑马鱼机体产生其它毒害。

发明内容

基于此，有必要针对上述提到的至少一个问题，提供一种α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法。

本发明申请提供的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，包括下列步骤：

饲养斑马鱼直至状态稳定；

将所述斑马鱼投入3％葡萄糖水中养殖2～6天，确定得高血糖斑马鱼模型；

在所述3％葡萄糖水中再加入杨梅苷，饲养所述高血糖斑马鱼模型若干天后，测定所述高糖斑马鱼模型的肠道样品中α-葡萄糖苷酶的酶活力。

在其中一个实施例中，所述饲养斑马鱼直至状态稳定的步骤，包括：

将斑马鱼放入水温为25℃～27℃的清水中，断食24小时；

向所述斑马鱼投喂丰年虫，每隔三天更换清水一次，每天对所述斑马鱼光照14小时；

检测到斑马鱼在两周内的死亡率小于或等于5％，确定所述斑马鱼为状态稳定。

在其中一个实施例中，所述将所述斑马鱼投入3％葡萄糖水中养殖2～6天的步骤，包括：

每天定时定量向所述斑马鱼投放过量食物；

间隔48小时更换2/3的3％葡萄糖水；

所述3％葡萄糖水的水温维持在25～27℃，控制所述斑马鱼的昼夜时长分别为14h和10h。

在其中一个实施例中，所述测定所述高糖斑马鱼模型的肠道样品中α-葡萄糖苷酶的酶活力的步骤，包括：