[发明专利]α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法

权利要求书

1.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，包括下列步骤：

饲养斑马鱼直至状态稳定；

将所述斑马鱼投入3％葡萄糖水中养殖2～6天，确定得高血糖斑马鱼模型；

在所述3％葡萄糖水中再加入杨梅苷，饲养所述高血糖斑马鱼模型若干天后，测定所述高糖斑马鱼模型的肠道样品中α-葡萄糖苷酶的酶活力。

2.根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述饲养斑马鱼直至状态稳定的步骤，包括：

将斑马鱼放入水温为25℃～27℃的清水中，断食24小时；

向所述斑马鱼投喂丰年虫，每隔三天更换清水一次，每天对所述斑马鱼光照14小时；

检测到斑马鱼在两周内的死亡率小于或等于5％，确定所述斑马鱼为状态稳定。

3.根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述将所述斑马鱼投入3％葡萄糖水中养殖2～6天的步骤，包括：

每天定时定量向所述斑马鱼投放过量食物；

间隔48小时更换2/3的3％葡萄糖水；

所述3％葡萄糖水的水温维持在25～27℃，控制所述斑马鱼的昼夜时长分别为14h和10h。

4.根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述测定所述高糖斑马鱼模型的肠道样品中α-葡萄糖苷酶的酶活力的步骤，包括：

测定α-葡萄糖苷酶浓度与吸光度值关系间的标准曲线；

解剖所述高糖斑马鱼模型，得到若干组肠道样品，并根据所述肠道样品制作待测液；

测定含有所述待测液的酶浓度测试液的实测吸光度曲线；

根据所述标准曲线和所述实测吸光度曲线，确定各组肠道样品中α-葡萄糖苷酶的酶活力。

5.根据权利要求4所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述测定α-葡萄糖苷酶浓度与吸光度值关系间的标准曲线的步骤，包括：

以磷酸盐缓冲盐溶液分别配制浓度为0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5U/mL的多组α-葡萄糖苷酶溶液；

在酶标板中加入第一容积的标准磷酸盐缓冲盐溶液和第二容积的所述α-葡萄糖苷酶溶液后，混匀得第一测试混合物；

将所述第一测试混合物在37℃下静置10min后，加入第三容积的PNPG溶液，混匀得第二测试混合物；

将所述第二测试混合物在37℃下静置30min后，加入第四容积的Na₂CO₃溶液，混匀后得第三测试混合物，并置于酶标仪中测定吸光度值。

6.根据权利要求4所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述测定含有所述待测液的酶浓度测试液的实测吸光度曲线的步骤，包括：

将所述肠道样品破碎后加入标准磷酸盐缓冲盐溶液，在4℃下静置1h后，离心处理后得到待用上清液；

在酶标板中加入第一容积的标准磷酸盐缓冲盐溶液和第二容积的所述待用上清液后，混匀得第一实测混合物；

将所述第一实测混合物在37℃下静置10min后，加入第三容积的PNPG溶液，混匀得第二实测混合物；

将所述第二实测混合物在37℃下静置30min后，加入第四容积的Na₂CO₃溶液，混匀后得第三实测混合物，并置于酶标仪中测定吸光度值，得到实测吸光度曲线。

7.根据权利要求5或6所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂体内评价方法，其特征在于，所述第一容积为60μL，所述第二容积为10μL，所述第三容积为10μL；所述第四容积为50μL；所述标准磷酸盐缓冲盐溶液的浓度为0.02mol/L，所述PNPG溶液的浓度为2.5mmol/L，所述Na₂CO₃溶液的浓度为0.2mol/L。