[发明专利]基于RPA-侧流层析技术检测转基因玉米MON810的引物组和方法

权利要求书

1.一种基于RPA-侧流层析技术检测转基因玉米MON810的引物组，其特征在于，其包括以下引物组中的一组或多组：

引物组I：

正向引物序列为：5’-TACAACGCCAAGCACGAGAC-3’；

反向引物序列为：5’-ATCTGCTGCAGGTGGTCTTAC-3’；

引物组II：

正向引物序列为：5’-GCTCAAGGCTTACACTCGCT-3’；

反向引物序列为：5’-AAAGGACCTGACTGCTCGC-3’；

引物组III：

正向引物序列为：5’-AGCTCAAGGCTTACACTCGC-3’；

反向引物序列为：5’-TGACTGCTCGCAAGCAAATTC-3’。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于，所述正向引物的5’端修饰有iSp18，在iSp18的另一端连接有序列为TTTTTTTTTTTTTTT的核酸分子；所述反向引物的5’端修饰有FITC。

3.一种基于RPA-侧流层析技术检测转基因玉米MON810的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1或2所述的引物组。

4.权利要求1或2所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在检测转基因玉米MON810中的应用。

5.一种基于RPA-侧流层析技术检测转基因玉米MON810的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

1)提取待测玉米的DNA；

2)以所提DNA为模板，使用权利要求1或2所述的引物组进行RPA扩增；

3)通过侧流层析技术对RPA扩增产物进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在步骤1)中，利用Wizard magnetic DNApurification system for food试剂盒中的试剂提取待测玉米的DNA，具体包括：

以100mg待测玉米的粉末为计算基准，将其与490-510μL Lysis buffer A和4-6μLRNaseA混合，大力晃动8-15s；而后加入240-260μL Lysis buffer B并大力晃动8-15s，在室温放置0.8-1.2min后，加入740-760μL Precipitation solution，大力晃动8-15s后，过滤除杂；

在除杂后的液体中加入45-55μLPMP，并大力晃动4-6s，而后加入790-810μL异丙醇，将试样倒置10–15次后，用磁铁聚集磁珠，弃去上清液，在磁珠中加入240-260μLLysis buffer B，倒置2-3次，用磁铁聚集磁珠，弃去上清液，并用乙醇溶液清洗磁珠；

在清洗后的磁珠中加入90-110μL无核酸酶水，并倒置4–6次，而后在37-42℃下孵育0.8-1.2min后，用磁铁聚集磁珠，收集上清液，即为待测玉米的DNA。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，在步骤2)的所述RPA扩增中，反应温度为37-42℃；和/或，反应时间为15-30min。

8.根据权利要求5-7中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤3)的侧流层析技术中，样品垫上的LFB缓冲液中含有：

4x SSC、2％BSA、0.05％Tween20、0.002％Triton x-100、10mM Tris-HAc和5mM KAc。

9.根据权利要求5-8中任一项所述的方法，其特征在于，在步骤3)的侧流层析技术中，

结合垫上的AuNPs-anti-FITC溶液的添加量为2.5-3.5μL；

和/或，样品垫上的RPA产物的添加量为4-6μL；

和/或，样品垫上的LFB缓冲液的添加量为150-200μL。

10.一种实现权利要求5-9中任一项所述方法的装置，其特征在于，其包括：

(1)带有卡槽的水槽；

(2)带有活塞的样品管；

其中，所述卡槽用于固定所述样品管，所述水槽用于提供水浴，所述活塞可将样品管分为上下两个空间，并用于控制上下两个空间的分隔和连通。