[发明专利]新型十六元大环内酯的制备方法及用途

权利要求书

1.一种制备大环内酯化合物的方法，其特征在于，所述大环内酯化合物选自化合物1或化合物2所述方法包括如下步骤：

1)取保藏号为CICC40293的灰黄青霉菌株Peniciliumgriseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的浓度为10mg/mL的25-methylivermectin，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液；按上述方法发酵培养得到2L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到4.5g油状物质；将所得的油状物质上粒径100-200目的硅胶柱进行柱层析，用体积比100:0-60:40的氯仿：甲醇进行梯度洗脱，通过TLC薄层鉴定检测，得到3个组分；将组分2经Sephadex LH-20凝胶柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进一步纯化得到纯的化合物1、化合物2，其中半制备柱色谱条件：流动相为92:8的甲醇-水；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL，收集保留时间为11.5min的峰得到化合物1，收集保留时间为15.5min的峰得到化合物2。

2.一种制备大环内酯化合物的方法，其特征在于，所述大环内酯化合物选自化合物3或化合物4所述方法包括如下步骤：

1)取保藏号为CICC40293的灰黄青霉菌株Peniciliumgriseofulvum，划线接种于PDA固体培养基上，在20-28℃的恒温培养箱中培养5-7天，将活化后的菌种转接于豆粕液体培养基中，置于20-28℃，250rpm的水平摇床中培养40小时，得到种子液，将种子液以每瓶1ml转接于新鲜豆粕液体培养基中100mL中，在180rpm/min，28℃条件下培养24h后，分别向每瓶中加入1mL有机溶剂溶解的浓度为10mg/mL的25-ethylivermectin，在相同的条件下转化培养96小时后，得到发酵液；按上述方法发酵培养得到3L发酵液，将发酵液用等体积乙酸乙酯分别萃取三次得乙酸乙酯萃取液，萃取液在50℃减压条件下浓缩至干，得到6.5g油状物质；将所得的油状物质上粒径100-200目的硅胶柱进行柱层析，用体积比100:0-60:40的氯仿：甲醇进行梯度洗脱，通过TLC薄层鉴定检测，得到3个组分；将组分2经Sephadex LH-20凝胶柱层析得到组分2-1，然后使用半制备柱色谱进一步纯化得到纯的化合物3、化合物4，其中半制备柱色谱条件：流动相为92:8的甲醇-水；色谱柱C18，9.4*250mm；检测波长：244nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量为：50uL，收集保留时间为12.1min的峰得到化合物3，收集保留时间为16.0min的峰得到化合物4。