[发明专利]淀粉壳层蛋白的提取鉴定方法

说明书

本发明提供了一种淀粉壳层蛋白的提取鉴定方法，包括以下步骤：A、配制淀粉乳，并进行不完全糊化得到悬浊液；B、将步骤A所得的悬浊液静置，待其分层，得到上层悬浮液和下层沉淀，随后冻干即得外壳结构和内壳结构；C、在步骤B得到的外壳结构和内壳结构中加入蛋白提取液离心后得到含有外壳蛋白和内壳蛋白的蛋白溶液；D、将步骤C得到的蛋白溶液经过SDS‑PAGE，分离出蛋白条带；E、将步骤D分离出的蛋白条带经LS‑MS鉴定，即可得到淀粉外壳蛋白和内壳蛋白的种类结果。本发明以低耗低成本和简单易行的方法有效分离淀粉外壳和内壳结构，首次提取淀粉内外壳的蛋白并进行鉴定，发现外壳的蛋白含量和种类低于内壳，可以用于淀粉结构的分析。

技术领域

本发明涉及食品技术领域，具体地，涉及一种淀粉壳层蛋白的提取鉴定方法。

背景技术

淀粉是自然界中含量仅次于纤维素和几丁质的天然高聚物，与前两者不同的是，淀粉可以被人体消化系统中的酶水解，为人体提供70-80％的能量，在人类生活中起着举足轻重的作用。淀粉除具有营养价值之外，还能影响食品的物理特性，在食品加工行业中得到广泛的应用，可以作为粘着剂、喷粉剂、保鲜剂等添加剂；同时淀粉作为一种可再生、可降解又廉价的天然资源，也是一种重要的工业原料。淀粉应用由其性质决定，性质由淀粉的结构决定，而目前对于淀粉结构的研究滞后于其性质和应用的研究，极大程度上制约了淀粉性能的开发，阻碍了淀粉更多应用领域的推广，全面解析淀粉结构一直是业界的研究热点和难点。

淀粉结构可分为分子结构、片层结构、Blocklet粒子、生长环和颗粒几个层次。淀粉的层次结构框架虽然已经建立起来，但是较为粗糙，难以为淀粉的性质研究提供精准定位。淀粉颗粒的生长环又称为壳结构层，是指围绕着脐心软硬交替(半结晶层和无定形层交替排列)的同心环状结构。近年来，业内采用不完全糊化法分离淀粉颗粒的外壳结构与内部壳层结构。适当控制糊化条件，如降低体系的处理温度，可使淀粉发生不完全糊化，使淀粉颗粒有限膨胀、局部破裂，而不失去可识别的颗粒形状。淀粉颗粒的外壳层比内壳层更坚韧，抵抗酸和热等外界条件的能力更强。这些研究结果的发现强烈表明淀粉颗粒内外壳层的构造不同。

人们在基于淀粉分子构建淀粉结构时，通常还含有非淀粉组分，如与淀粉颗粒紧密缔合的微量蛋白质约占0.1％-0.8％，称之为淀粉颗粒结合蛋白。淀粉颗粒结合蛋白与淀粉颗粒相互作用的主要方式是疏水作用、氢键和静电引力。淀粉颗粒结合蛋白主要是淀粉合成酶，贮藏蛋白和与保护谷物免受生物和非生物胁迫相关的蛋白。淀粉颗粒结合蛋白虽然在淀粉中的含量极低，对淀粉理化性质和消化性影响显著。但淀粉颗粒结合蛋白在淀粉结构上的分布及其结构的关系鲜有报道，限制了淀粉结构的解析。若以淀粉内外壳层为模型，研究蛋白质分子在壳层结构的分布和组成，可进一步明确蛋白质分子与淀粉结构的关系。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种淀粉壳层蛋白的提取鉴定方法。本发明以低耗低成本和简单易行的方法有效分离淀粉外壳和内壳结构，首次提取淀粉内外壳的蛋白并进行鉴定，发现外壳的蛋白含量和种类低于内壳，可以用于淀粉结构的分析。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

本发明提供一种淀粉壳层蛋白的提取鉴定方法，包括以下步骤：

A、称取淀粉，配制淀粉乳，然后对淀粉乳进行不完全糊化得到悬浊液；例如，可以使用快速黏度分析仪(澳大利亚Newport Scientific公司RVA-4)糊化；

B、将步骤A所得的悬浊液静置，待其自然分层，得到上层悬浮液和下层沉淀，随后冻干即得位于下层的外壳结构和位于上层的内壳结构；

C、在步骤B得到的外壳结构和内壳结构中加入蛋白提取液离心后得到含有外壳蛋白和内壳蛋白的蛋白溶液；

D、将步骤C得到的含有外壳蛋白和内壳蛋白的蛋白溶液经过SDS-PAGE，分离出蛋白条带，将其条带切下；