[发明专利]5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒

说明书

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及5种病原菌多重PCR检测的引物、探针及其试剂盒。本发明引物探针支持高通量检测，可快速实现金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和念珠菌五种病原菌的联合检测，准确高、特异性好。根据目标病原体的定量/半定量检测结果，可实时、快速监测血流感染患者体内的特定病原体的变化，及时评估患者状况，能有效地起到准确诊断这些病原体，做到早发现、早预防、早治疗、早控制，为临床医生提供辅助治疗建议，如合理选择使用抗菌药物，以减少医院感染机会，在科研领域和临床上具有极高的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及5种病原菌多重PCR检测的引物、 探针及其试剂盒。

背景技术

血流感染(blood stream infection,BSI)是指各种病原微生物侵入血液循环，在血液中繁殖，释放毒素及代谢产物，并诱导细胞因子释放，引起全身炎症 反应综合征，进一步导致血压下降、感染性休克、凝血及纤溶系统改变，最 终引起全身多器官功能不全，是一种严重的全身感染。入侵血液的病原体主 要为细菌、真菌以及霉菌。细菌(包括G^-阴性菌和G⁺阳性菌)仍是主要的病 原微生物，据CHINET 2020数据显示，临床血液标本分离菌的主要细菌依次 为大肠埃希菌(23.18％)、肺炎克雷伯菌(16.51％)、表皮葡萄球菌(8.39％)、金黄色葡萄球菌(7.90％)、人葡萄球菌(6.18％)、屎肠球菌(3.95％)、铜绿 假单胞菌(3.32％)、鲍曼不动杆菌(2.95％)、粪肠球菌(2.55％)、阴沟肠杆菌 (2.27％)、头状葡萄球菌(2.21％)和溶血葡萄球菌(1.80％)。其中G^-阴性菌仍然 是主要入侵菌种，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆 菌共占比45.86％，G⁺阳性菌中表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、人葡萄球菌 和肠球菌共占比28.97％。

葡萄球菌属共包括30多个种，根据是否产生游离的血浆凝固酶分为血浆 凝固酶阳性和血浆凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase-negative Staphylocoeei，CNS) 两大群。前者以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为代表，金黄色葡萄球 菌广泛分布于自然界和医院环境中，是一种常见的致病菌，在20％的正常人 鼻腔中存在金黄色葡萄球菌的长期定植，30％的人可间断携带该菌，金黄色 葡萄球菌的定植是其引起感染的一个主要危险因素。该菌可引起从浅表的皮 肤、软组织感染到肺感染、败血症等毒素参与的多种感染性疾病。金黄色葡 萄球菌是引起血流感染的重要病原菌，在过去十几年中由金黄色葡萄球菌引 起的菌血症的发生率不断增加，CHINET 2020数据显示血流感染中金黄色葡 萄球菌占比7.90％。凝固酶阴性葡萄球菌是定居在人体皮肤和黏膜表面的正常 菌群。1971年，Holt首先报道了CNS导致的败血症。随着介入性诊疗技术的 广泛应用，侵袭性诊疗操作所引起的导管相关性静脉炎、导管相关性软组织 炎、导管相关性菌血症，气管插管相关性感染，导尿相关性感染、内窥镜及 腹腔镜相关性感染等原因，由凝固酶阴性葡萄球菌引起的各种导管相关性感 染等报道逐渐增多。虽然CNS感染主要是由表皮葡萄球菌所致，但其他的一 些菌属如人型葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、华纳葡萄球菌等亦已经被证实与 人类感染有关。CHINET 2020数据显示血流感染中表皮葡萄球菌、人葡萄球 菌、头状葡萄球菌和溶血葡萄球菌共占比18.58％。

肠球菌是革兰阳性球菌，属于链球菌科，是存在于人类肠道的正常菌群。 它是一种条件致病菌，不仅可引起泌尿系、皮肤软组织感染，还可导致菌血 症、心内膜炎、脑膜炎等严重感染。其中对人类致病的肠球菌主要为粪肠球 菌和屎肠球菌，约90％以上的肠球菌感染是由粪肠球菌和屎肠球菌引起。近 年来随着抗菌药物的广泛应用，肠球菌引起的医院感染呈逐渐上升趋势，其 成为最常见医院感染菌之一。CHINET 2020数据显示血流感染中粪肠球菌和 屎肠球菌共占比6.5％。