[发明专利]一种鼠李糖苷酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鼠李糖苷酶突变体，其特征在于，为将氨基酸序列为如SEQ ID NO：1所示的鼠李糖苷酶的突变位点突变为丙氨酸得到的突变体，所述突变位点为第512位的色氨酸、第570位的组氨酸和第579位的赖氨酸中两个以上的组合。

2.根据权利要求1所述的一种鼠李糖苷酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列为如SEQID NO：3或SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：5或SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8或SEQID NO：9所示。

3.根据权利要求2所述的一种鼠李糖苷酶突变体，其特征在于，包括编码氨基酸序列如SEQ ID NO：6所示的鼠李糖苷酶突变体的编码基因，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：10所示。

4.一种权利要求1-3任一项所述的鼠李糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将鼠李糖苷酶基因连接到质粒中，得到重组质粒；

S2，设计突变引物，采用突变引物并以所述重组质粒为模板进行PCR扩增，酶切消化去除模板DNA，得到突变产物；

S3，将突变产物转化至宿主细胞中，筛选得到鼠李糖苷酶突变体表达菌株，诱导表达，得到鼠李糖苷酶突变体。

5.根据权利要求4所述的一种鼠李糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，所述鼠李糖苷酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.根据权利要求4所述的一种鼠李糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，突变引物序列如SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15和SEQ IDNO：16所示。

7.根据权利要求4所述的一种鼠李糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为酿酒酵母菌或大肠杆菌。

8.根据权利要求4所述的一种鼠李糖苷酶突变体的制备方法，其特征在于，所述PCR扩增的具体参数为：预变性98℃ 3min；循环设定：变性98℃ 10s，退火62℃ 15s，延伸72℃3min，30个循环；最后延伸72℃ 10min；反应结束。

9.权利要求1-3任一项所述的一种鼠李糖苷酶突变体在制备淫羊藿次苷Ⅰ组合物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，利用鼠李糖苷酶突变体催化转化淫羊藿总黄酮中的多组分黄酮糖苷制备淫羊藿次苷Ⅰ组合物。