[发明专利]微球及其制备方法、检测方法

说明书

本发明提供了微球及其制备方法、检测方法，所述微球包括球形本体；所述本体表面修饰有官能团，部分官能团上偶联螯合物，所述螯合物螯合金属离子。本发明具有检测准确度高、快速等优点。

技术领域

本发明涉及微球，特别涉及微球及其制备方法、检测方法。

背景技术

磁性高分子微球是指通过采用一定的方法将有机高分子与无机磁性材料结合起来制成的具有磁性和一定特殊结构的微米级磁球。因其具有独特的磁响应性、比表面积大、生物相容性好以及表面易功能化等特点,在生物医学和分离工程等多个领域都具有广泛的应用,如核磁共振成像(MRI)、细胞标记及分离、核酸和蛋白质分离纯化等。其中磁性微球应用在流式细胞技术中可以实现生物标记物的高通量和快速检测，在生物检测领域有非常重要的应用前景。

传统流式细胞技术中，磁性微球作为主要的检测载体，通过荧光染色可对微球进行编码，之后使蛋白/核酸探针与微球偶联可形成荧光探针，进而与待测物进行生物学反应从而达到检测抗体/核酸的目的。该技术主要使用各种荧光基团作为待测物标签，检测手段为激光器和光电倍增管，在检测过程中，不同通道之间容易出现荧光串色的问题，需要额外调节荧光补偿，这导致流式荧光技术的检测通道受到限制，且在进行多参数检测时，调节荧光补偿则变得异常复杂。

发明内容

为解决上述现有技术方案中的不足，本发明提供了一种微球。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

微球，所述微球包括球形本体；所述本体表面修饰有官能团，部分官能团上偶联螯合物，所述螯合物螯合金属离子。

本发明的目的还在于提供了上述微球的制备方法，该发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

根据本申请的微球的制备方法，所述微球的制备方法为：

表面修饰有官能团的球形本体加入到化学活化试剂中，活化所述官能团；

加入金属螯合剂，并反应；

加入金属盐，所述螯合剂螯合金属盐中的金属离子。

本发明的目的还在于应用上述微球的检测方法，该发明目的是通过以下技术方案得以实现的：

基于质谱技术和微球的检测方法，所述基于质谱技术和微球的检测方法为：

提供多种本申请的微球，每一种微球螯合的金属离子的组成不同，且表面的探针不同，所述金属离子的质量数与所述探针一一对应；

多种微球的探针分别与待测样本中的多种核酸或抗体发生特异性反应；

利用质谱技术检测多种微球上的金属离子的组成，从而获得了样本与微球上修饰的核酸探针或抗体发生特异性反应的信息。

与现有技术相比，本发明具有的有益效果为：

1.本发明中给(磁性)微球修饰镧系金属离子的方法简单有效，可操作性强；

ANTA和Iso-EDTA具有非常强的配位能力，能够与金属离子紧密螯合，结合效率高；

2.检测准确度高、分辨率高；

选择作为标记的金属大部分为稀有金属，如镧系金属，在细胞中含量基本为零，因此检测背景极低；

ICP-MS等质谱技术检测通道数量较多，一次可以同时检测上百个不同的参数，且相邻通道之间干扰较小，解决了流式细胞检测时荧光串色的问题，不需要再额外调节荧光补偿；

使用了质谱技术，如ICP-TOF-MS技术，检测不同质量数金属离子含量，显著地提高了金属离子的检测准确度，也即提高了核酸检测的准确度；