[发明专利]S-mink基因、S-mink蛋白的制备方法和应用、及用于动物的新型冠状病毒抗体检测试纸和制备方法

说明书

本发明涉及S‑mink基因、S‑mink蛋白的制备方法和应用、及用于动物的新型冠状病毒抗体检测试纸和制备方法。本发明在原始S蛋白(GenBank序列号为QNJ45226.1)胞外区基因的基础上进行了大幅度的改进设计，优化后的S‑mink序列密码子适应指数(CodonAdaptation Index,CAI)为0.89，更适用于昆虫杆状病毒表达系统。本发明利用上述真核系统表达纯化得到的重组S蛋白(S‑mink蛋白)作为抗原制备动物感染的新型冠状病毒抗体检测试纸，该试纸能快速准确的检测待测小鼠、水貂、猫、狗、养等动物血清中动物感染的新型冠状病毒抗体，5min内完成检测，并且检测灵敏度高。试验证明，待测水貂血清中新型冠状病毒抗体浓度为100ng/mL时依然可以准确检出，是一种携带方便、快速、准确检测动物感染的新型冠状病毒抗体的产品。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，具体涉及S-mink基因、S-mink蛋白的制备方法和应用、 及用于动物的新型冠状病毒抗体检测试纸和制备方法。

背景技术

令人担心的是，水貂这样的哺乳动物是很适合新冠病毒的动物宿主，新冠病毒可能在这 些物种内逐渐变化，需要在农场内确保生物安全，避免新冠病毒再从动物传给人类。因此亟 需一种动物感染的新型冠状病毒的快速检测技术，对动物感染新型冠状病毒的情况实时监控， 及时避免SARS-Cov-2病毒从动物传给人类，实现高效防控。

目前，新型冠状病毒的检测方法分为核酸检测技术和抗体检测技术两大类。病毒核酸检 测技术主要是基于聚合酶链反应技术(polymerase chain reaction,PCR)的实时荧光定量PCR检 测以及非聚合酶依赖性的等温扩增技术，包括环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP)，交叉引物扩增技术(Cross primeramplification，CPA)和重组酶介导 链替换核酸扩增技术(Recombinase-mediated chainreplacement nucleic acid amplification technique，RAA)；抗体检测技术主要包括间接荧光抗体(indirect fluorescent antibody,IFA)、 酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)和免疫印迹试验 (immuneblotting test)等。一方面，现有的检测技术均是用于人类新型冠状病毒的检测，据报 道，对所有水貂感染的新冠肺炎阳性样品进行“cluster 5”检测，到目前为止，12个变异的 新冠肺炎病毒被称为“cluster5”。它来自被新冠肺炎病毒感染的貂，有可能破坏疫苗研发， 因此需要针对性的检测动物感染的新型冠状病毒方法。另一方面，PCR等核酸检测方法一般 需要专业实验室或专业设备，同时对操作人员的技术要求也十分严苛，耗时长，比如病毒基 因组RNA的提取操作复杂，对下一步检测的准确性影响较大；ELISA和PCR的方法则需要 酶标仪、PCR仪等昂贵的实验仪器；因此，上述方法均不适合基层或现场快速检测或诊断， 开发一种操作简单的快速检测动物感染的新型冠状病毒抗体的实时检测技术是目前亟需解决 的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供S-mink基因的核苷酸序列，该基因表达的蛋白能够用于动物用新 型冠状病毒抗体检测试剂盒的制备。

本发明的第二个目的在于提供包含上述S-mink基因的表达盒、重组载体、重组细胞或重 组菌。

本发明的第三个目的在于提供用于扩增S-mink基因的引物。

本发明的第四个目的在于提供S-mink蛋白的制备方法。

本发明的第五个目的在于提供S-mink蛋白制备方法的应用。

本发明的第六个目的提供用于动物的新型冠状病毒抗体检测试纸。

本发明的第七个目在于提供用于动物的新型冠状病毒抗体检测试纸的制备方法。