[发明专利]一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用

说明书

本发明提供了一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用，属于病毒免疫检测技术领域。一种新冠病毒SARS‑CoV‑2广谱多肽抗原，氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与SARS‑CoV‑2人阳性血清的反应，能够特异性与新冠病毒抗体结合。基于本发明的多肽序列，利用PCR、原核表达及蛋白纯化技术，制备了三重SARS‑CoV‑2广谱多肽串联融合蛋白，模拟SARS‑CoV‑2S蛋白自然状态下三聚体模式，以该融合蛋白作为抗原免疫小鼠，可以产生抗SARS‑CoV‑2特异性中和抗体，所述中和抗体在SARS‑CoV‑2抗感染治疗、疫苗研发和检测试剂盒研制中将具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于病毒免疫检测技术领域，具体涉及一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用。

背景技术

新型冠状病毒SARS-CoV-2是一种传染性极强的病毒。SARS-CoV-2的S蛋白包含两个亚基：S1和S2。S1亚基通过其RBD与细胞受体血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，而S2亚基通过融合肽(FP)介导病毒与细胞膜的融合。由于S2在感染过程中的融合过程中的重要作用，可以作为广泛保护的靶点。目前，SARS-CoV-2逃逸突变体的频繁出现，给当下针对具有免疫优势的受体结合域(RBD)新冠疫苗策略带来了挑战。

然而，目前尚无针对SARS-CoV-2S2的广谱疫苗及检测抗S2抗体的快速检测方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种SARS-CoV-2广谱多肽抗原，所述抗原在SARS-CoV-2原型株以及众多流行突变株中均无突变，可特异性识别新冠病毒SARS-CoV-2的抗体，具有较好的抗原性。

本发明提供了一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原，所述广谱多肽抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明提供了一种三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白，所述融合蛋白包括3条所述新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原的序列串联排列。

优选的，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

本发明提供了所述三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白的构建方法，包括以下步骤：

1)以pCold I质粒为模板，用核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的引物对进行PCR扩增，得到线性化pCold I表达载体；

2)以pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S质粒为模板，用SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的引物对进行PCR扩增第一片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3所示的引物对进行PCR扩增第二片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对进行PCR扩增第三片段；

3)利用重组酶对步骤1)中所述线性化pColdⅠ表达载体、步骤2)中所述第一片段、第二片段和第三片段进行快速重组克隆，得到重组质粒；

4)将步骤3)中所述重组质粒转化细胞，经培养、IPTG诱导得到融合蛋白。

优选的，步骤2)中所述PCR扩增的反应程序为94℃变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸3min，30个循环；最后72℃延伸10min；

所述PCR扩增的反应体系为33μl水，10μl 5倍缓冲液，1μl 10mM dNTP，2μl 10μmol上游引物，2μl 10μmol下游引物，1μl 10ng/μl的pColdⅠ质粒或pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S质粒，1μl商品化的Phanta Super-Fidelity DNA聚合酶。