[发明专利]一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原及其特异性中和抗体和应用

权利要求书

1.一种新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原，其特征在于，所述广谱多肽抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

3.权利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）以pCold I质粒为模板，用核苷酸序列如SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示的引物对进行PCR扩增，得到线性化pCold I表达载体；

2）以pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S 质粒为模板，用SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的引物对进行PCR扩增第一片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3所示的引物对进行PCR扩增第二片段，用SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物对进行PCR扩增第三片段；

3）利用重组酶对步骤1）中所述线性化pCold Ⅰ表达载体、步骤2）中所述第一片段、第二片段和第三片段进行快速重组克隆，得到重组质粒；

4）将步骤3）中所述重组质粒转化细胞，经培养、IPTG诱导得到融合蛋白。

4.根据权利要求3所述构建方法，其特征在于，步骤2）中所述PCR扩增的反应程序为94℃变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸3min，30个循环；最后72℃延伸10min；

所述PCR扩增的反应体系为33μl水，10μl 5倍缓冲液，1μl 10 mM dNTP，2μl 10 μmol上游引物，2μl 10 μmol 下游引物，1μl 10ng/μl的pCold Ⅰ质粒或pcDNA3.1- SARS-CoV-2-S质粒，1μl商品化的Phanta Super-Fidelity DNA 聚合酶。

5.权利要求1所述新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原、权利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白在制备SARS-CoV-2广谱亚单位疫苗和/或免疫检测新冠病毒SARS-CoV-2 S2抗体的试剂盒中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，所述免疫检测包括胶体金免疫检测、免疫沉淀检测、荧光免疫检测和/或酶联免疫检测。

7.一种用于检测新冠病毒SARS-CoV-2抗体的ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括抗原包被的酶标板；所述抗原包括权利要求1所述新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽抗原或权利要求2所述三重新冠病毒SARS-CoV-2广谱多肽串联融合蛋白。