[发明专利]具有中和活性的抗新冠病毒兔重组单克隆抗体及应用

说明书

本发明涉及具有中和活性的抗新冠病毒SARS‑CoV2‑S‑RBD蛋白兔重组单克隆抗体及应用，所得到的抗体具有良好的特异性，最重要的是该抗体可以阻断新冠病毒RBD蛋白与其受体ACE2蛋白的相互作用，具有潜在的中和病毒的治疗价值。

技术领域

本发明属于生物技术中的抗体制备领域，特别是涉及具有中和活性的抗新冠病毒SARS-CoV2-S-RBD兔重组单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒2019-nCov又称SARS-CoV-2，人感染该病毒后主要出现呼吸道症状、发热、咳嗽以及呼吸困难等，严重者可引起肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭甚至死亡。尽管疫苗接种是预防新型冠状病毒最为有效的方法，但是目前还没有批准上市的疫苗产品，而对于已感染的病人，目前也没有特异性的治疗药物。不过，已有大量证据证明康复患者的血浆可以有效的治疗新冠患者，其中有效的成分是血浆中含有高浓度的中和抗体。因此，开发中和活性的抗体可能是治疗新型冠状病毒的一个有效的候选措施。

新型冠状病毒属于单股正链RNA病毒，病毒粒子表面外包着脂肪膜，膜表面主要有三种糖蛋白，其中刺突糖蛋白（Spike蛋白）有两个亚基即S1和S2，其中S1亚基上有一个受体ACE2蛋白的结合位点（RBD），介导宿主细胞的融合。目前对该位点的中和活性抗体开发的文献已经有很多，一部分是通过康复病毒血液中分离特异性B细胞获得全人源的单克隆抗体，一部分是通过噬菌体展示技术获得人源化的单克隆抗体，但是还没有真正上市的产品。例如，中国专利申请CN2020101393840中涉及SARS-CoV-2抑制剂及其应用，其是从患者恢复期外周血中的PBMC细胞，通过噬菌体展示技术制备了对SARS-CoV-2病毒有较强的中和作用的抗体。CN2020108392266等专利申请也均通过患者恢复期外周血中的PBMC细胞制备单克隆抗体。

由于单一中和性抗体的阻断效果有限，在研究中发现通过鸡尾酒方式将多个中和活性的抗体联用，可以获得更佳的抗病毒的效果。由于兔抗体的亲和力相对其他来源的抗体要高，而且抗体表位覆盖面要广，因此开发针对新冠病毒RBD蛋白兔源的具有中和活性的单克隆抗体可为治疗性中和抗体的开发提供更多的选择。

发明内容

本发明目的在于提供具有中和活性的抗新冠病毒SARS-CoV2-S-RBD兔重组单克隆抗体，以阻断ACE2蛋白和RBD蛋白的作用，选自以下兔重组单克隆抗体的一种或多种：

命名为2B6的兔重组单克隆抗体：其重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；且轻链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列；

命名为2H5的兔重组单克隆抗体：其重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列，且轻链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列；

命名为4B1的兔重组单克隆抗体，其重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ IDNO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列，且轻链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列；

命名为6B10的兔重组单克隆抗体，其重链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列，且轻链互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列；