本发明涉及一种抗SIRPα兔重组单克隆抗体及其制备方法和应用,该抗SIRPα兔重组单克隆抗体的重链互补决定区HCDR1、HCDR2、HCDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列,且轻链互补决定区LCDR1、LCDR2、LCDR3的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。该抗SIRPα兔重组单克隆抗体具有良好的特异性,可用于ELISA和普通的流式检测方法中,最重要的是该抗体可以阻断CD47蛋白与SIRPα蛋白的相互作用,具有潜在的肿瘤免疫治疗的价值。