[发明专利]溶瘤性HSV载体

说明书

本发明提供了一种重组溶瘤性单纯疱疹病毒(oHSV)，其包含特异性针对在细胞(例如癌细胞)表面上存在的分子(蛋白、脂质或碳水化合物抗原决定簇)的非HSV配体，和插入到一个或多个HSV基因(优选地为HSV在正常(即，非癌性)细胞中复制所需的一个或多个HSV基因)座中的一个或多个拷贝的一种或多种microRNA靶序列。本发明进一步提供了包含创新的oHSV的原液和药物组合物，以及使用所述创新的oHSV杀灭肿瘤细胞的方法。

相关申请的交叉引用

本申请为申请日为2014年10月28日，申请号为201480071446.1的中国国家阶段申请的分案申请。其母案申请要求于2013年10月28日提交的美国临时专利申请61/896,497的优先权，其全部内容在此通过引用并入。

关于联邦政府资助的研究与开发的声明

本发明是在由美国国立卫生研究院授予的基金号CA119298、CA163205、CA175052、NS040923和DK044935下借助政府支持而进行的。政府在本发明中具有某些权利。

发明背景

即便应用现有的联合疗法，多形性胶质母细胞瘤(GBM)仍是一种致命性疾病。临床前研究表明具有复制能力的病毒载体(包括溶瘤性HSV(“oHSV”)载体)有望成为替代性的治疗方法，但其在患者的临床试验中治疗效果有限。实现载体安全性依赖于减毒载体突变,而该突变还可能会危害在肿瘤细胞中的裂解复制。

发明概述

本发明提供了一种具有肿瘤选择性扩增能力但未减毒的oHSV，其可通过结合再靶向肿瘤相关细胞表面受体的载体和由细胞microRNA(“miR”)导致的载体的复制抑制来实现，其中所述细胞microRNA在正常脑中高度表达而在肿瘤细胞中几乎是不存在的。miR反应性元件在裸鼠脑中阻碍载体的发病过程，而不妨碍在体外或异种脑肿瘤模型中的原代肿瘤细胞中的胞溶性载体复制。该新载体设计将提供一种更安全且更有效的载体平台，并可进一步开发以应用于患者肿瘤。

附图若干视图的简要说明

图1呈现了来自T124元件的有效性和特异性的实验结果的数据。将在3’UTR中包含T124(pfLuc-T124)或对照序列(pfLuc-Ctrl)的萤火虫荧光素酶(fLuc)表达质粒与海肾荧光素酶(prLuc)内参质粒共转染入在24小时前已经转染了合成的pre-miR-124或pre-miR-21的HEK293AD细胞中。48小时后测定荧光素酶活性。结果表示为根据rLuc活性进行标准化的fLuc活性的三次测定值的均值±标准偏差。具有统计学上显著性差异的数据对由相应P值(未配对t检验)下的方括号表示。