[发明专利]一种检测发酵液中庆大霉素含量的方法

说明书

本发明属于成分检测技术领域，具体涉及一种检测发酵液中庆大霉素含量的方法，包括以下步骤：a、制备庆大霉素标准溶液和发酵液样品溶液；b、将庆大霉素标准溶液加水稀释成5个系列浓度的标准工作溶液，各吸取1mL于25mL比色管中，加入茚三酮溶液5mL，沸水浴15‑25min，冷却后用水稀释到刻度，在1小时内进行比色；以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得到标准曲线和线性回归方程；c、吸取1mL样品溶液于25mL比色管中，按照b步骤中的处理方法进行反应和比色，将样品的吸光度代入b步骤所得标准曲线，得到样品溶液的浓度；样品溶液的浓度乘以稀释倍数即得发酵液中庆大霉素的含量。该法能有效避免基质干扰；检测过程简单直接，引入误差少，准确度高。

技术领域

本发明属于成分检测技术领域，具体涉及一种检测发酵液中庆大霉素含量的方法。

背景技术

庆大霉素[Gentamicin，正泰霉素(gentamycin)]系从放线菌科单孢子属发酵培养液中提得的氨基糖苷类抗生素，主要用于治疗细菌感染。庆大霉素是目前临床用于抗各种革兰阴性菌感染的主要抗生素之一，而且是为数不多的热稳定性的抗生素，因而在国内外得到广泛应用。发酵生产庆大霉素的企业也很多。

发酵过程中的含量检测对于庆大霉素的发酵生产过程控制具有重要意义。然而目前药典和文献报道的庆大霉素的检测方法多是用于原料药、成品(注射液、片剂、胶囊、眼药水)或半成品等样品的检测，包括微生物检定法、液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)、液相色谱-脉冲安培电化学检测法(HPLC-PAD)、离子色谱-脉冲安培电化学检测法(IC-PAD)、液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)、核磁共振法(NMR)、酶联免疫法(ELISA)、旋光法等，还有一些报道是用于庆大霉素残留限量检测的免疫试剂盒或试纸条法，而用于庆大霉素发酵样品检测的只有分光光度法(《紫外分光光度法快速测定庆大霉素发酵液中庆大霉素浓度及其机理》)和薄层色谱法。

上述检测方法中，微生物检定法是药典规定的成品效价检测方法，它和酶联免疫法的缺点都是操作繁冗复杂，影响因素多，检测周期长，且对检测人员要求较高；旋光法操作简单，但只适用于基质简单的注射液或提纯液；核磁共振法和液质联用法专属性、准确度都较高，但仪器成本太高，企业尚未普及；HPLC-ELSD和HPLC-PAD分别是中国药典和欧美药典规定的用于庆大霉素原料药及制剂组分测定的方法，若用于基质复杂的发酵样品检测，检测器易受污染，同时过程样品的跟踪检测数量较大，势必会产生昂贵的成本费用；薄层色谱法能在一定程度上对主要组分进行分离，但重现性和准确性差，不适合定量检测。

对于液相色谱资源紧张或车间环境不适合精密仪器的生产单位来说，分光光度法是一种较为理想的发酵样品检测方法，其与微生物检定法相比，操作步骤相对简单、快速，准确度和精密度较高，对检测人员的操作要求较低；但因为庆大霉素本身没有紫外吸收，检测过程需要衍生或水解后才能测定。文献报道的紫外分光光度法利用磷钨酸钠与庆大霉素生成白色沉淀的特性，通过分光光度法测定反应后剩余的磷钨酸钠的含量，从而计算出参与反应的磷钨酸钠的量，再根据反应关系计算出庆大霉素的含量。该法属于间接测定，中间涉及的步骤和数量关系较多，测量误差易因叠加而变大。所以本发明希望提供一种简单直接的测定方法。

由于发酵液基质复杂，对没有分离功能的分光光度法容易产生干扰，所以利用离子交换树脂的纯化功能对发酵液进行处理的方法值得借鉴。

发明内容

本发明为了解决上述现有技术中存在的问题，提供了一种检测发酵液中庆大霉素含量的方法，能够快速准确地检测出庆大霉素发酵液中庆大霉素的含量。

本发明采用的具体技术方案是：一种检测发酵液中庆大霉素含量的方法，关键是：包括以下步骤：

a、制备庆大霉素标准溶液和发酵液样品溶液；