[发明专利]一种普卡那肽的片段合成方法

说明书

本发明属于多肽药物制备领域，公开了一种普卡那肽的片段合成方法，该方法包括以下步骤：(1)在Fmoc‑Leu‑树脂上，按照普卡那肽肽序采用固相合成方法得到线性普卡那肽树脂；其中，S5‑S8采用四肽片段，其余采用相应的保护氨基酸或片段；(2)将步骤(1)得到的线性普卡那肽树脂裂解，得到线性普卡那肽；(3)将步骤(2)得到的线性普卡那肽经环化，得普卡那肽粗肽。本发明工艺有效改善了固相合成过程中肽树脂收缩导致偶联困难的问题，减少了相关缺失肽杂质的生成，大大降低了普卡那肽的合成与纯化难度，制备的普卡那肽纯度高、收率高、杂质少，是一种具有广泛的实用价值和应用前景的普卡那肽制备方法。

技术领域

本发明属于多肽药物制备领域，具体为一种普卡那肽的片段合成方法。

背景技术

慢性特发性便秘(CIC)和肠易激综合征伴便秘(IBS-C)是影响胃肠道的两种最常见的疾病，这些疾病的特点是大便次数减少、紧张、腹痛或不适。我国成人慢性便秘，包括CIC、功能性排便障碍及IBS-C等，患病率4％-6％。慢性便秘可继发精神心理障碍，对患者生活质量损害程度与糖尿病、心衰等慢性疾病相当。

普卡那肽(plecanatide)是由美国Synergy制药公司研发的一种鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体激动剂，于2017年1月19日被FDA批准上市，商品名为Trulance。普卡那肽为含有16个氨基酸的环状多肽，能调节胃肠道中的酸碱离子，诱导液体转运进入胃肠道，增加胃肠道的蠕动，适用于治疗成人慢性特发性便秘，其结构式如下：

现有技术中，公开号为CN104211777A的专利采用Fmoc固相合成法，逐步偶联合成普卡那肽线性肽树脂，裂解后得到普卡那肽线性肽，然后在液相中分步氧化得到普卡那肽，氧化过程中，根据Cys侧链保护基的特性选择不同的脱保护策略，采取双氧水和碘进行分步氧化。然而根据实验发现，该合成方法在一些氨基酸偶联后会发生肽树脂的缩聚现象，造成线性肽合成困难、粗品纯度低、纯化困难。公开号为CN110981939A的专利采用Fmoc固相合成法，逐步或片段偶联合成普卡那肽线性肽树脂，其中采用Hmb/Dmb对Gly、Ala氨基酸进行保护，裂解后得到线性肽，然后在液相中用双氧水和碘分步氧化形成两对二硫键，得到普卡那肽。此方案虽然可以改善树脂的缩聚问题，但是Hmb/Dmb物料价格昂贵，不利于成本控制，很难实现工业化生产。公开号为CN109354607A的专利，采用八肽片段与八肽树脂在缩合剂的存在下固相缩合得到十六肽树脂，裂解得到线性肽，然后在液相中用双氧水和碘分步氧化形成两对二硫键，得到普卡那肽，此法制得的普卡那肽纯化后总收率可达32.45％，纯度可达99％以上。本发明可大大缩短合成周期，避免了传统固相逐步偶联效率低的问题，然而全保护的S8-S1八肽片段，位阻较大，偶联困难，且在DMF或者DCM的溶解性差，不利于反应进行，操作相对复杂，成本较高。

发明内容

为了克服普卡那肽在合成过程中出现的偶联困难、操作复杂、树脂缩聚等现象，解决逐步偶联环化后出现的纯度低、收率低的问题，本发明提供了一种普卡那肽的片段合成方法，主要包括以下步骤：

(1)在Fmoc-Leu-树脂上，按照普卡那肽肽序采用固相合成方法得到线性普卡那肽树脂；其中，S5-S8采用四肽片段，其余采用相应的保护氨基酸或片段；

(2)将步骤(1)得到的线性普卡那肽树脂裂解，得到线性普卡那肽；

(3)将步骤(2)得到的线性普卡那肽经分步环化，得普卡那肽粗肽。

进一步地，所述步骤(1)得到的线性普卡那肽树脂为：R₁-Asn(R₂)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(R₃)-Glu(OtBu)-Leu-Cys(R₄)-Val-Asn(Trt)-Val-Ala-Cys(R₃)-Thr(tBu)-Gly-Cys(R₄)-Leu-树脂；

其中：