[发明专利]分离的多肽、核酸及其应用在审
| 申请号： | 202110581745.1 | 申请日： | 2021-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN113403287A | 公开（公告）日： | 2021-09-17 |
| 发明（设计）人： | 陈晶瑜;黄灿;于波;张臻峰 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N1/21;C12N15/70;C12P17/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 肖阳 |
| 地址： | 100094 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分离 多肽 核酸 及其 应用 | ||
1.一种分离的多肽，其特征在于，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有310位氨基酸突变。
2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，与野生型肌肽合成酶SEQ ID NO:1相比，所述多肽具有p.Gly310Ala或p.Gly310Ser。
3.根据权利要求2所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:2或3所示的氨基酸序列相比具有至少95％同一性的氨基酸序列。
4.一种分离的核酸，其特征在于，与野生型肌肽合酶基因SEQ ID NO:4相比，具有下列突变组合的至少之一：
c.929GC和c.930CT；和
c.928GCc.929GC和c.930CT。
5.根据权利要求4所述的核酸，其特征在于，所述核酸具有SEQ ID NO:5～7任一项所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NO:5～7任一所示的核苷酸序列相比具有至少95％同源性的核苷酸序列。
6.一种构建体，其特征在于，包含权利要求3～4任一项所述的核酸。
7.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞是通过权利要求5所述的构建体转化受体细胞获得的。
8.根据权利要求7所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为大肠杆菌。
9.一种提高肌肽合成酶活性的方法，其特征在于，使所述肌肽合成酶的第310位氨基酸发生突变；
优选地，使所述肌肽合成酶的第310位Gly突变为Ala或Ser。
10.权利要求1～3所述的多肽、权利要求4～5任一项所述的核酸、权利要求6所述的构建体、权利要求7～8所述的重组细胞在制备L-肌肽中的用途。
11.一种制备肌肽的方法，其特征在于，包括:
将如权利要求2所述的多肽与β-丙氨酸和/或β-丙氨酸衍生物进行催化反应，以便获得所述肌肽。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述多肽是由权利要求7～8任一项所述的重组细胞表达的；
任选地，所述方法包括将所述重组细胞在所述β-丙氨酸和/或β-丙氨酸衍生物存在的条件下进行发酵处理，以便获得所述肌肽；
优选地，所述β-丙氨酸衍生物为β-丙氨酸甲酯和/或β-丙氨酸甲酯盐；
更优选地，所述β-丙氨酸甲酯盐为β-丙氨酸甲酯盐酸盐。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述发酵处理是在包含组氨酸的发酵培养基中进行的；
优选地，所述组氨酸与β-丙氨酸和/或β-丙氨酸衍生物的摩尔比为(1～12):5,优选为1:1；
任选地，所述发酵处理是在温度为25～35摄氏度，优选30摄氏度的条件下进行3～6小时；
任选地，所述发酵处理的初始pH为6～8，优选为7。
14.一种制备肌肽的方法，其特征在于，包括：
将权利要求8所述的大肠杆菌在发酵培养基中进行3～6小时的发酵处理，所述发酵培养基中包括L-组氨酸与β-丙氨酸甲酯盐酸盐，所述发酵处理的温度为25～35摄氏度，所述发酵处理的初始pH为6～8；
其中，所述L-组氨酸与β-丙氨酸甲酯盐酸盐的摩尔比为(1～12):5,优选为1:1。
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