[发明专利]一种抗肌红蛋白的抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种抗肌红蛋白的抗体及其制备方法和应用，其中，所述抗肌红蛋白的抗体包括：抗体IE6和抗体9B2；其中，所述抗体IE6的氨基酸序列为：VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3分别如SEQ ID NO.1‑3所示；VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3分别如SEQ ID NO.4‑6所示；所述抗体9B2的氨基酸序列为：VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3分别如SEQ ID NO.9‑11所示；VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3分别如SEQ ID NO.12‑14所示。本发明提供的抗体具有高亲和力和高特异性，可以应用于抗肌红蛋白试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及抗体及体外检测领域。具体而言，本发明涉及一种抗肌红蛋白的抗体及其制备方法和应用。

背景技术

肌红蛋白(Myoglobin,Mb)是一种由一条肽链和一个血红素辅基组成的结合蛋白，属于球蛋白家族。Mb的多肽链由8个α-螺旋组成，分子量约为16kD，含153个氨基酸残基。

Mb是一种储氧蛋白，其结合氧的亲和力比血红蛋白高六倍，由肌红蛋白储存的氧气由血红蛋白输送。Mb主要分布于心肌和骨骼肌组织。在肌细胞内有转运和贮存氧的作用，在心肌受损时即从心肌细胞中弥散出来进入血液循环。任何导致横纹肌溶解的情况都会增加血液中的肌红蛋白值，两个常见的例子是心脏病发作与肌肉损伤。

Mb可以用于诊断心肌和骨骼肌损伤，确定损伤程度。因为Mb是个较小分子的球蛋白，心肌或骨骼肌损伤时Mb可以从肌肉组织漏到循环血中去，而且能通过肾小球滤过，出现在尿中。因此血清和尿中Mb测定可用于某些肌病和心脏病的诊断，如急性肌损伤、急慢性肾衰竭、严重的充血性心力衰竭、长时间休克，神经肌肉病如肌营养不良、肌萎缩、皮肌炎，及各种原因引起的肌病。但是目前对于抗肌红蛋白抗体的研究中，单克隆抗体的数量较少，可用于检测人血清中肌红蛋白的抗体适配性较差。

发明内容

本发明的目的是提供高亲和力和高特异性的抗人肌红蛋白的单克隆抗体，为具有优良性质的鼠源抗体，其能够特异性识别和结合人血清中的肌红蛋白。

一方面，本发明提供一种抗肌红蛋白的抗体，包括：(1)包含下述3个互补决定区(CDR)的重链可变区(VH)：(i)VH CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.1或9所示的序列；(ii)VH CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.2或10所示的序列；(iii)VHCDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.3或11所示的序列；和/或，(2)包含下述3个互补决定区(CDR)的轻链可变区(VL)：(iv)VL CDR1，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.4或12所示的序列；(v)VL CDR2，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.5或13所示的序列；(vi)VL CDR3，其由选自下列的序列组成：SEQ ID NO.6或14所示的序列。

在优选的实施方案中，所述重链可变区中含有的3个CDR和/或所述轻链可变区中含有的3个CDR由Chothia编号系统定义。

进一步地，所述抗体包括：重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7或NO.15所示；和/或，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8或NO.16所示。

进一步地，所述抗体为鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体、双特异性抗体或多特异性抗体；所述抗原结合片段选自Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、双抗体(diabody)或单域抗体(sdAb)。

进一步地，所述抗体还包括：哺乳动物免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体1，所述变体1与其所源自的序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加；以及，哺乳动物免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体2，所述变体2与其所源自的序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换。