[发明专利]一种玉米赤霉烯酮模拟抗原表位及其应用

说明书

本发明公开了一种玉米赤霉烯酮模拟抗原表位及其应用，属于生物技术领域。所述模拟抗原表位的氨基酸序列为HLNLNIYITQKH、ATLHSAHRSTH V和AEAWTGFSASGV。本发明以4D7mAb为配基，对噬菌体展示随机十二肽库进行4轮的亲和淘选、噬菌斑的扩增和纯化以及ZEN模拟抗原表位的鉴定等，对玉米赤霉烯酮抗原表位进行了深入研究，得到了ZEN的模拟抗原表位，其中3个出现频率较高模拟抗原表位的IC₅₀值分别为0.918ng/mL、1.972ng/mL以及1.29ng/mL。以所述模拟抗原表位为基础建立的直接竞争荧光免疫分析方法检测ZEN，IC₅₀值为0.158ng/mL，灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种玉米赤霉烯酮模拟抗原表位及其应用。

背景技术

随着国家经济发展水平的提高，食品安全问题也越来越多地被人们所关注，霉菌污染是造成食品安全问题的一个重要因素。霉菌毒素主要通过谷物作物以及经过加工的农副产品进入人和动物体内，引起人和动物的中毒症状，其中对生殖系统以及内分泌系统等造成的伤害最为严重，摄入过量将会造成生命危险，给人类以及动物的健康造成一定的危害。

目前已经鉴定出的霉菌毒素已经超过了300种，较为常见的主要有6种，分别为黄曲霉毒素(Aflatoxin,AFT)、赭曲霉毒素(Ochratoxin,OT)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)、T-2毒素(Trichothecenes,TS)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)以及伏马毒素(Fumonisins,FB)。其中ZEN对粮食作物的污染情况较为严重，ZEN是由镰刀菌种产生的一种有强雌激素效应的真菌毒素，普遍存在于受污染的谷物和谷物产品中。ZEN具有强毒性，对生殖系统、内分泌系统以及免疫系统有很大的危害，严重时可能导致肿瘤的发生，对人类和动物的健康造成潜在的危害。因此需要采取有效的措施来预防和消除ZEN的毒性作用，并建立一种安全无毒的方法来检测ZEN的残留。

使用化学方法合成抗原的过程中避免不了毒素分子的使用，毒素标准品价格十分昂贵而且容易对实验人员的健康构成威胁。相比较而言，利用噬菌体展示技术筛选模拟表位来代替化学合成的抗原，在实验研究中具有很大的优势。在噬菌体展示技术的基础上创建噬菌体展示随机肽库技术，通过生物淘选过程，可以获得能识别靶标的模拟表位序列,抗原表位通过结合到相应抗原受体上从而引起机体产生针对抗原的抗体。

发明内容

本发明的目的是提供一种玉米赤霉烯酮模拟抗原表位及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，基于模拟抗原表位建立的直接竞争荧光免疫分析方法用于检测ZEN，具有低毒性、成本低且灵敏度高的优点。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种玉米赤霉烯酮的模拟抗原表位，其氨基酸序列为：HLNLNIYITQKH(SEQ ID NO：1)、ATLHSAHRSTHV(SEQ ID NO：2)和AEAWTGFSASGV(SEQ ID NO：3)。

本发明还提供一种编码所述的玉米赤霉烯酮的模拟抗原表位的核苷酸。

优选的是，其序列如SEQ ID NO：4-SEQ ID NO：6所示。

本发明还提供一种抗体，其利用展示有所述的模拟抗原表位序列或者所述的核苷酸序列的噬菌体克隆免疫小鼠产生。

本发明还提供一种基于所述的模拟抗原表位或者所述的核苷酸检测玉米赤霉烯酮的方法，其特征在于，包括以量子点为荧光染料制备荧光探针，通过直接竞争荧光免疫分析方法检测玉米赤霉烯酮的步骤。

本发明还提供一种基于所述的模拟抗原表位或者所述的核苷酸在检测玉米赤霉烯酮中的应用。

优选的是，应用所述的方法检测所述玉米赤霉烯酮含量。

本发明公开了以下技术效果：