[发明专利]检测常见呼吸道病毒的引物组合及方法

权利要求书

1.一种检测常见呼吸道病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括针对流感A病毒检测的引物对SEQ ID No.1～2、针对流感B病毒检测的引物对SEQ ID No.3～4、针对人鼻病毒检测的引物对SEQ ID No.5～6、针对人偏肺病毒检测的引物对SEQ ID No.7～8、针对副流感病毒1型检测的引物对SEQ ID No.9～10、针对副流感病毒2型检测的引物对SEQ IDNo.11～12、针对副流感病毒3型检测的引物对SEQ ID No.13～14、针对副流感病毒4型检测的引物对SEQ ID No.15～16、针对OC43型冠状病毒和229E型冠状病毒检测的引物对SEQ IDNo.17～18、针对HKU1型冠状病毒和NL63型冠状病毒检测的引物对SEQ ID No.19～20，针对合胞病毒A型和B型检测的引物对SEQ ID No.21～22、以及针对2019ncov新型冠状病毒检测的引物对SEQ ID No.23～24中的两对或以上。

2.根据权利要求1所述的检测常见呼吸道病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合的工作浓度为10nM-10uM。

3.根据权利要求2所述的检测常见呼吸道病毒的引物组合，其特征在于，所述引物组合的工作浓度为100nM-10uM。

4.一种常见呼吸道病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、将检测常见呼吸道病毒12对引物中的两对或以上进行混合，制成混合引物；所述混合引物的工作浓度为10nM-10uM；所述12对引物分别为：针对流感A病毒检测的引物对SEQID No.1～2、针对流感B病毒检测的引物对SEQ ID No.3～4、针对人鼻病毒检测的引物对SEQ ID No.5～6、针对人偏肺病毒检测的引物对SEQ ID No.7～8、针对副流感病毒1型检测的引物对SEQ ID No.9～10、针对副流感病毒2型检测的引物对SEQ ID No.11～12、针对副流感病毒3型检测的引物对SEQ ID No.13～14、针对副流感病毒4型检测的引物对SEQ IDNo.15～16、针对OC43型冠状病毒和229E型冠状病毒检测的引物对SEQ ID No.17～18、针对HKU1型冠状病毒和NL63型冠状病毒检测的引物对SEQ ID No.19～20，针对合胞病毒A型和B型检测的引物对SEQ ID No.21～22、以及针对2019ncov新型冠状病毒检测的引物对SEQ IDNo.23～24；

(2)、提取待检测样本中的RNA，逆转录为cDNA；

(3)、以步骤(2)的cDNA为模板，步骤(1)的混合引物为引物，进行第一次PCR扩增反应；

(4)、回收第一次PCR扩增产物，纯化；

(5)、将步骤(4)纯化后的第一次PCR扩增产物，按不同的待检测样本接上不同的Barcode序列，同时连上测序接头，再以此为模板，进行第二次PCR扩增反应，纯化扩增产物；

(6)、将步骤(5)所有第二次PCR扩增反应产物混合，测序；鉴定待检测样本中呼吸道病毒的种类。

5.根据权利要求4所述的常见呼吸道病毒的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述第一次PCR扩增反应的反应体系为：30ul反应体系中，待检测样本cDNA 8～14ul、混合引物4～10ul、PCR酶8～12ul。

6.根据权利要求4所述的常见呼吸道病毒的检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述第一次PCR扩增反应的反应条件为：95℃预变性3min；95℃变性20s，60℃延伸4min，25个循环；72℃延伸4min；10℃保温。