[发明专利]用于检测外周T细胞淋巴瘤相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针

说明书

本发明涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测外周T细胞淋巴瘤相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针。试剂盒中含有PCR扩增试剂和对照品，PCR扩增试剂中含有用于检测突变位点RHOA G17V和IDH2‑R172的引物和探针，引物的序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示；探针的序列如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7～SEQ ID NO:10所示。本发明的试剂盒采用数字PCR技术，对人类RHOA G17V和IDH2‑R172等突变进行定量检测，为临床医生对外周T细胞淋巴瘤患者实现精准监测、指导临床用药提供参考。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体讲，涉及一种用于检测外周T细胞淋巴瘤相关基因突变的数字PCR试剂盒及引物和探针。

背景技术

淋巴瘤是全球发病率最高的血液系统恶性肿瘤，具有种类多样、分型复杂的特点。在我国癌症发病率的统计中(Cancer Statistics in China,2015)位列前十，年发病率达到6.78每10万人，年因病死亡率为5.21每10万人。作为异质性很强的疾病，传统的淋巴瘤分类主要依托于病理形态、免疫组化、细胞遗传学和单基因突变的检测方法，对淋巴瘤细胞来源及恶性程度进行判断。根据对淋巴瘤的认识及多参数的分类方法，大体上可以分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s Lymphoma,HL)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s Lymphoma,NHL)两大类，后者又可以进一步根据免疫细胞来源分为如B细胞非霍奇金淋巴瘤或T细胞非霍奇金淋巴瘤等不同类别。

外周T细胞淋巴瘤(PTCL)是一组来源于成熟、胸腺后T细胞的罕见的异质性淋巴系统恶性疾病，PTCL的发病率在全世界有着显著的地域差异。PTCL在美国约占非霍奇金淋巴瘤(NHL)发病率的6-10％，是一组异质性淋巴瘤，绝大部分具有侵袭性的临床病程。根据最新的WHO 2016造血与淋巴组织肿瘤分类，PTCL包含29个亚型。PTCL发病率低，诊断困难，即使在发达国家也存在极高的误诊率。中国PTCL约占非霍奇金淋巴瘤(NHL)的25％-30％，显著高于欧美国家的10％-5％。生物学行为和临床呈现高度的异质性和侵袭性，病情发展迅速，缺乏高效、特异的治疗手段，预后较差。根据WHO分型(2016年)可以将PTCL氛围至少29种亚型，其中最为常见的是外周T细胞淋巴瘤-非特指型(PTCL-NOS)、血管免疫母T细胞淋巴瘤(AITL)、间变大细胞淋巴瘤(ALCL、NK/T细胞淋巴瘤(ENKL)和成人T细胞淋巴瘤/白血病(ATLL)。根据不同的PTCL的亚型，在临床上也有着不同的临床特征、遗传学改变和治疗反应，因此给临床诊断和治疗带来了极大的困难。

初治PTCL最常用的一线治疗方案为CHOP(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松)和CHOP样方案。但是除ALK⁺ALCL外，整体治疗发难对其他病理亚型的治疗疗效均较差，5年的生产率仅为30％。针对这类具有难治复发潜能的患者，需要在CHOP方案的基础上，或治疗达到缓解后，尽早采取自体造血干细胞移植，改善部分患者的长期预后。但是多数患者因未能取得缓解或体能情况等原因无法接受造血干细胞移植。对于复发或难治性PTCL，我国根据2018年版西达本胺治疗外周T细胞淋巴瘤中国专家共识建议使用组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase，HDAC)抑制剂联合传统化疗方案，并已在PTCL治疗中取得了显著的成果，目前我国药品监督管理局(NMPA)批准了新型HDAC抑制剂西达本胺(chidamide，爱谱沙)的上市使用。