[发明专利]一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用

说明书

本发明提供了一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用，包括Takin‑F和Takin‑R，具体序列为：Takin‑F：5’‑TTCTGCGATTCTGCTTCGTG‑3’；Takin‑R：5’‑CCAGACCCGATGAACACCAG‑3’。本发明的引物Takin‑F和Takin‑R用于鉴定羚牛肌肉组织特异性时采取荧光定量PCR法，提高了鉴定的灵敏性、特异性、精确性和鉴定速度。

技术领域

本发明属于动物分子生物学技术领域，涉及羚牛防盗猎鉴定，具体涉及一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用。

背景技术

羚牛(Budorcas taxicolor)为我国的一级保护动物，栖息于高海拔、高寒悬崖地段，体形较大，往往成为非法盗猎的目标，森林公安在缴获盗猎羚牛酮体时，依赖传统分类形态特征无法将其与牛、羊等区分，存在较大的局限性，依赖传统分类形态特征鉴定羚牛不仅费时费力，而且常受主观因素干扰，极易混淆出错，除此之外，传统的鉴定方法难以开展针对残缺个体的鉴别。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于，提供一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物及其应用，解决现有技术中羚牛防盗猎鉴定费时费力的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案予以实现：

一种用于羚牛防盗猎鉴定的引物，包括Takin-F和Takin-R，具体序列为：

Takin-F：5’-TTCTGCGATTCTGCTTCGTG-3’；

Takin-R：5’-CCAGACCCGATGAACACCAG-3’。

本发明还保护一种如上所述的用于羚牛防盗猎鉴定的引物用于羚牛防盗猎鉴定的应用。

具体的，该应用为采用荧光定量PCR法，将Takin-F和Takin-R作为荧光定量 PCR扩增的引物，进行羚牛防盗猎鉴定。

具体的，荧光定量PCR法具体包括如下步骤：

步骤一，提取并保存羚牛肌肉组织总RNA；

步骤二，反转录PCR扩增：

取出步骤一中所述的羚牛肌肉组织总RNA，将羚牛肌肉组织总RNA去除基因组DNA后作为反转录PCR扩增的RNA模板，混合反转录PCR反应液，设定反转录PCR反应程序，进行反转录PCR扩增，得到cDNA混合液；

步骤三，荧光定量PCR扩增：

将步骤二中的cDNA混合液用水稀释后，即得到荧光定量PCR扩增的cDNA 模板，分别制备实验组荧光定量PCR反应液和内参组荧光定量PCR反应液，制备好的实验组荧光定量PCR反应液和内参组荧光定量PCR反应液后，设定荧光定量 PCR反应程序，进行荧光定量PCR扩增，获得相应的数据；

步骤四，将步骤三中获得的数据进行处理和结果分析。

具体的，步骤一中，所述的提取羚牛肌肉组织总RNA的具体方法包括如下步骤：

步骤1.1，取出保存在-80℃的羚牛肌肉组织，加入1mL的Trizol裂解液和两个钢珠后，剧烈震荡，使羚牛肌肉组织在Trizol裂解液中充分裂解，得到混合液 A；

步骤1.2，在步骤1.1中所述的混合液A中加入0.2mL氯仿，剧烈震荡30s后，室温孵育3min，得到混合液B；

步骤1.3，将步骤1.2中所述的混合液B在4℃，1200r/min的条件下离心15min，得到分层的混合液C，混合液C的上层清液中包含羚牛肌肉组织总RNA，中间层包含羚牛肌肉组织蛋白质，最下层包含氯仿；