[发明专利]一种H3N2禽流感病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种H3N2禽流感病毒检测试剂盒，所述试剂盒包括：10μM H3引物对、10μM N2引物对、10μM H3探针、10μM N2探针、5×TaqMan探针荧光定量PCR反应预混液、50×Rox dye、超纯水、2.5mM dNTP Mix、5×RT Buffer、RNase‑Free Wa ter、SuperRT(200U/μl)、阳性对照模板、阴性对照，所述的阳性对照模板为含有H3、N2序列的线性质粒，所述的阴性对照为PBS，本发明的有益效果是提供了一种快速、准确检测H3N2禽流感病毒的试剂盒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种H3N2禽流感病毒检测试剂盒。

背景技术

流感是人类最严重的传染病之一，有可能引起严重的呼吸道感染，每次季节性流感会感染全球约5-15％的人口，每年多达50万人死亡。流感病毒可分为A、B、C三种类型，其中可引起大流行的是A型流感病毒。A型流感病毒大约为100nm，呈球状，在它的表面上分布着刺凸状的血凝素(HA)三聚体以及神经氨酸酶(NA)四聚体糖蛋白。由于HA和NA的抗原性不同，分成18种HA(H1-H18)和11种NA(N1-N11)亚型。目前，在人类中流行的主要是H1N1和H3N2亚型。本发明的目的是提供一种能快速、准确检测H3N2禽流感病毒的试剂盒。

发明内容

本发明的目的是提供一种能快速、准确检测H3N2禽流感病毒的试剂盒。

为达到上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

本申请一方面公开了一种用于H3N2禽流感病毒检测的引物序列，H3上游引物为Seq ID No.1所示序列，H3下游引物为Seq ID No.2所示序列，H3探针为Seq ID No.3所示序列，N2上游引物为Seq ID No.4所示序列，N2下游引物为Seq ID No.5所示序列，N2探针为Seq ID No.6所示序列。

本申请的另一方面公开了用于H3N2禽流感病毒检测的试剂盒组成，该试剂盒包括：10μM H3引物对、10μM N2引物对、10μM H3探针、10μM N2探针、5×TaqMan探针荧光定量PCR反应预混液、50×Rox dye、超纯水、2.5mM dNTP Mix、5×RT Buffer、RNase-FreeWater、SuperRT(200U/μl)、阳性对照模板、阴性对照，所述的阳性对照模板为含有H3、N2序列的线性质粒，所述的阴性对照为PBS。

本申请的再一方面还公开了一种H3N2禽流感病毒的使用方法，包括以下步骤：

1.提取待测样品的基因组RNA；

2.将RNA反转录成cDNA，体系如下：

表1反转录体系

将上面配好的体系，70℃孵育10min，迅速冰浴2min，加入5×RT Buffer，轻轻吹打混匀，加入1μlSuperRT(200U/μl)，轻轻吹打混匀，42℃孵育50min，85℃孵育5min，反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却，或置于-20℃长期保存；

3.配制荧光定量PCR反应体系，体系如下：

表2荧光定量PCR反应体系