[发明专利]一种实时荧光定量PCR仪校准试剂盒

说明书

本发明公开了一种实时荧光定量PCR仪校准试剂盒，包括PCR预混液、PCR酶、标准品及引物干板，所述标准品是以cDNA G1、cDNA G2、cDNA G3、cDNA G4中的两种或四种cDNA的混合物；试剂盒检测的靶标为miRNA，靶标miRNA包含至少一种高GC占比miRNA和至少一种低GC占比miRNA。本发明能全面准确评估设备的真实性能，可以观测出设备的边际效应情况，对于研究者需要进行精准研究时，可以根据试剂盒的校准情况，有效避开明显影响的边际范围。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种实时荧光定量PCR仪校准试剂盒。

背景技术

随着基因领域研究的推进，基因检测技术也获得了快速发展，实时荧光定量PCR仪的应用也越来越广泛。实时荧光定量PCR检测技术是指在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，实时荧光定量PCR仪整合的元件非常多，系统复杂，体积也较大，设备的校准一直是一个较为困难的问题。为保持其检测的精度，设备每年又需要按时进行校准。目前实时荧光定量PCR的校准一般是请厂家或者专业的第三方机构进行校准，自己往往没有想要的设备及校准能力，所以校准费用往往比较高，而且校准的方式也是比较粗放的，不能精确反应设备的实际状况，比如设备都有的边缘效应，但没有校准方式能体现边缘效应大概有多大，大概什么范围内的反应是相对稳定的，因此，提供一种低成本简易并且精确的校准方式就显得非常重要。

目前针对荧光定量PCR仪的校准主要有两种方式：一种是对荧光定量PCR仪的温场部分进行校准，这种方法无法对荧光定量PCR仪的光学部分进行校准，不能对设备性能进行全面的评估；另外一种是利用化学试剂对设备进行检测，一般是使用生物试剂测试盘或采用已知浓度的质粒DNA，这种方法比较粗放，不能很精确的反应设备性能，不能体现出设备的边缘效应，孔间温差的微小差别可能在基因扩增的过程中被指数级放大，对于较精细的实验可能会影响实验结果。

发明内容

本发明的目的在于解决实时荧光定量PCR仪精确校准问题，提供一种实时荧光定量 PCR仪校准试剂盒，能全面准确评估设备的真实性能，可以观测出设备的边际效应情况，对于研究者需要进行精准研究时，可以根据试剂盒的校准情况，有效避开明显影响的边际范围。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种实时荧光定量PCR仪校准试剂盒，包括PCR预混液、PCR酶、标准品及引物干板，所述标准品是以cDNA G1、cDNA G2、cDNA G3、cDNA G4中的两种或四种cDNA的混合物， cDNAG1的序列见SEQ ID No.1所示，cDNA G2的序列见SEQ ID No.2所示，cDNA G3的序列见SEQID No.3所示，cDNA G4的序列见SEQ ID No.4所示；试剂盒检测的靶标为 miRNA，靶标miRNA包含至少一种高GC占比miRNA和至少一种低GC占比miRNA。

所述靶标miRNA包括miRNA G1、miRNA G2、miRNA G3和miRNA G4，其中miRNA G1和miRNA G4的GC占比为20％-40％(低GC占比)，miRNA G2和miRNA G3的GC占比为60％-80％(高GC占比)。

miRNA G1的序列见SEQ ID No.5所示，miRNA G2的序列见SEQ ID No.6所示，miRNAG3的序列见SEQ ID No.7所示，miRNA G4的序列见SEQ ID No.8所示。

cDNA G1是以miRNA G1为模板逆转录而得或根据序列直接合成；cDNA G2是以miRNA G2为模板逆转录而得或根据序列直接合成；cDNA G3是以miRNA G3为模板逆转录而得或根据序列直接合成；cDNA G4是以miRNA G4为模板逆转录而得或根据序列直接合成。

所述PCR酶为DNA聚合酶，浓度为2U/ul-10U/ul。