[发明专利]亚甲基四氢叶酸还原酶基因分型的引物、探针及检测方法

权利要求书

1.MTHFR基因C677T突变位点的检测方法，其特征在于，所述方法为，依据MTHFR基因C677T突变位点设计的LAMP引物组合以及SNP TaqMan特异检测荧光探针，对待测样品恒温孵育后进行熔解曲线分析，进而鉴定MTHFR基因的野生型、纯合突变型和杂合型中的任意一种。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述LAMP引物组合为：

正向外引物F3:5'-GGAGCTTTGAGGCTGACCT-3'；

反向外引物B3:5'-GTGAGAGTGGGGTGGAGG-3'；

反向环引物LB:5'-CCATCGTCCCCGGGATCTTTC-3'；

正向内引物FIP:

5'-GCGGAAGAATGTGTCAGCCTCAAGCACTTGAAGGAGAAGGTG-3'；

反向内引物BIP:

5'-ACCGACATGGGCATCACTTGCGAGCTTATGGGCTCTCCTGG-3'。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述SNP TaqMan特异检测荧光探针为：

SNP TaqMan探针：荧光基团5'-TGAAATCGGCTCCCGCAGA-3'淬灭基团。

4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述SNP TaqMan特异检测荧光探针5'端所使用的荧光基团为适用于SNP TaqMan熔解曲线分析的荧光报告基团，包括FAM、VIC、TET、HEX和ROX中的任意一种；SNP TaqMan特异检测荧光探针3'淬灭的基团为BHQ和TAMRA任意一种。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，还包括LAMP反应体系。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述LAMP反应体系包括：LAMP缓冲液、dNTPs、Bst DNA聚合酶、Betaine、LAMP特异性扩增引物、SNP TaqMan特异检测荧光探针、去离子水。

7.含有权利要求2～6任一项所述的检测方法，其特征在于，包括步骤：

步骤一：取待检样本抽提的DNA为模板；

步骤二：利用如上所述的LAMP检测液分别对DNA模板进行LAMP扩增，增加Melt Curve程序；

步骤三：结果判定：依据熔解曲线的结果来得到待检测样本MTHFR C677T基因位点的基因型。

8.根据权利要求7所述的检测方法的使用方法，其特征在于，所述LAMP反应扩增反应的条件为：60-65℃恒温孵育30-60min。其后增加Melt Curve熔解曲线分析步骤。熔解曲线分析的条件为：先降至低温(如35℃)，以一定升温速率(如0.08℃/s)升温至高温(如95℃)，每秒采集SNP TaqMan特异检测荧光探针对应荧光基团荧光(如FAM荧光)。