[发明专利]一种RNA文库的构建方法及试剂盒

权利要求书

1.一种RNA文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

向片段化的总RNA中加入能够与rRNA特异性结合并延伸的探针，孵育，所述探针不带接头序列；

加入逆转录体系进行第一次逆转录；

加入带有接头序列的随机引物进行第二次逆转录，得到逆转录产物；

加入连接引物和连接酶将所述逆转录产物进行连接，得到连接产物；

加入扩增引物，对所述连接产物进行PCR扩增，得到所述RNA文库；

所述接头序列为ACGCTCTTCCGATCT；

所述孵育的条件为：60℃ 5min；

所述第一次逆转录条件为：42℃ 10min；

所述探针长度为5-45bp；

所述连接酶为5’App DNA/RNA热稳定连接酶。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述连接引物为CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT，其中，连接引物的5'端腺苷酸化。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述扩增引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物从5’端至3’端依次包括：上游测序平台序列、第一文库标签序列以及上游测序引物序列，所述下游引物从5’端至3’端依次包括：下游测序平台序列、第二文库标签序列以及下游测序引物序列，其中，所述下游测序引物序列与所述随机引物的5’端的至少部分序列相同或互补，所述上游测序引物序列与所述连接引物的5’端的至少部分序列相同或互补。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述扩增引物序列为：

上游引物：

GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXXXXATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG；

下游引物：

AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACXXXXXXXXACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC，

其中XXXXXXXX为index序列。