[发明专利]一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗及其构建方法

说明书

本发明属于RNA疫苗的技术领域，具体涉及一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗及其构建方法。其构建为通过选取猪源的5’UTR、3’UTR与毒株的S蛋白、终止密码子、polyA核酸序列串联，得到RNA疫苗，采用脂质纳米颗粒作为RNA疫苗的运送载体，能够快速应对当前流行野毒株的PEDV新毒株，能够高效迅速地针对变异病毒，本发明制备的猪流行性腹泻的RNA疫苗成本低、生产效率高，且能同时诱导细胞免疫与体液免疫，所制备的脂质纳米颗粒包裹RNA疫苗能够快速应对当前流行野毒株的PEDV新毒株，尤其是变异强毒株，减少了新疫苗开发的研发及生产周期，为新变异强毒株的防控提供有效的技术手段。

技术领域

本发明属于RNA疫苗的技术领域，具体涉及一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗及其构建方法。

背景技术

猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea，PED)是一种常见的、急性、高度流行性的猪肠道病毒传染病，病原为猪流行性腹泻病毒(PEDV)。该病主要临床症状是腹泻，包括水样腹泻，以及其它包括呕吐、厌食、脱水和体重降低等症状，临床变化和症状与猪传染性胃肠炎(TGE)，猪流行性腹泻是导致仔猪早期死亡的主要疫病之一。

1971年英国首次报道了该病，然后欧洲各国相继开始流行，我国于1976年首次对该病有了报道，从20世纪80年代后期开始，PED在中国各地区蔓延开来，并于1995年开始用二联灭活苗或弱毒苗进行猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的联合预防。

2000年在国内开始流行，从2006年初开始，PEDV疫苗的免疫效果越来越差，免疫过的猪群照常爆发PEDV。从2010年起，高致病变异毒株在中国暴发流行，导致PED的发病率和死亡率大幅升高，严重影响中国养猪生产。病毒分离及检测数据表明本次大流行是由于变异PEDV毒株引起的，南方流行的毒株在长期传播过程中经历逐渐的基因变异，这种情况也可能造成了国内疫苗免疫失效，而且PEDV发生的突变会更多地集中在S基因，个别毒株是疫苗弱毒株或野毒株与疫苗毒株的重组病毒。

目前世界范围PEDV主要分为四种类型：亚洲经典毒株、亚洲变异毒株、美洲INDELs毒株及美洲强毒力毒株。其中亚洲经典毒株和美洲INDELs毒株为弱毒力毒株；亚洲变异毒株和美洲强毒力毒株为强毒力毒株。美洲强毒力毒株被认为来源于亚洲变异毒株。美洲INDELs毒株非常特殊，是由美洲强毒力毒株的骨架和亚洲经典毒株的S基因重组产生。在此背景下，相关科研人员针对病原及其疫苗开展了大量研究工作，也为PED的防控提供了理论依据。

早期对PED的防控主要采用组织灭活苗，但组织灭活苗病毒含量较低，免疫持久性不强，往往需要多次免疫，因此不利于规模化养殖场的大群免疫；有多种疫苗包括细胞灭活苗、弱毒疫苗以及亚单位疫苗等对毒株均有较好的免疫效果，但是PED之所以能在全球流行并给养殖户造成巨大经济损失，正是因为PEDV毒株基因型种类繁多且易发生基因变异，使得毒株毒力增强，因此现有疫苗难以发挥保护作用。国内猪流行性腹泻病毒毒株不仅已发生变异，形成新的毒株，而且毒株间存在基因差异，形成基因源多样性，这些因素都可以造成疫苗失效和疫病流行。传统的灭活苗和弱毒苗的研制需要一定的周期，疫苗的研发速度往往赶不上病毒的变异速度。临床上急需针对当前流行野毒株的PEDV新毒株疫苗。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗及其构建方法，通过选取猪源的5’UTR、3’UTR与毒株的S蛋白、终止密码子、polyA核酸序列串联，得到RNA疫苗，采用脂质纳米颗粒作为RNA疫苗的运送载体，能够快速应对当前流行野毒株的PEDV新毒株。

本发明的技术内容如下：

本发明提供了一种用于猪流行性腹泻的RNA疫苗，所述RNA疫苗为采用含有5’UTR、猪流行性腹泻病毒的S蛋白、终止密码子、3’UTR以及polyA核酸的序列合成；

所述疫苗还包括纳米脂质颗粒，所述纳米脂质颗粒包裹RNA疫苗；